应用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得高直链淀粉马铃薯
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 一. 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 马铃薯 | 第11页 |
| 1.2 马铃薯直链淀粉及淀粉分支酶 | 第11-14页 |
| 1.2.2 马铃薯直链淀粉特性及应用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 淀粉合成途径及相关酶 | 第12-13页 |
| 1.2.4 淀粉分支酶基因(SBE) | 第13-14页 |
| 1.3 CRISPR-Cas9基因编辑技术 | 第14-18页 |
| 1.3.1 CRISPR技术基本原理及优势 | 第14-16页 |
| 1.3.2 CRISPR技术在动植物中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 CRISPR编辑效率的影响因素 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 二. 实验材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 载体 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 设计基因靶序列 | 第20页 |
| 2.2.2 CRISPR载体构建 | 第20-22页 |
| 2.2.3 三亲融合法 | 第22页 |
| 2.2.4 马铃薯试管苗的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的马铃薯茎段转化 | 第23页 |
| 2.2.6 植物基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.7 阳性株鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.8 测序检测阳性株打靶效果 | 第24-25页 |
| 2.2.9 盆苗种植及薯块收获 | 第25页 |
| 2.2.10 直链淀粉含量测定 | 第25-27页 |
| 三. 实验结果 | 第27-41页 |
| 3.1 载体构建 | 第27-30页 |
| 3.1.1 SBEⅠ和SBEⅡ靶序列选择及合成 | 第27-28页 |
| 3.1.2 载体构建及阳性筛选 | 第28-30页 |
| 3.2 马铃薯转化株的获得及鉴定 | 第30-35页 |
| 3.2.1 转化株的获得 | 第30-32页 |
| 3.2.2 转化株打靶检测 | 第32-35页 |
| 3.3 收获及测产 | 第35-37页 |
| 3.4 直链淀粉含量测定 | 第37页 |
| 3.5 载体优化 | 第37-41页 |
| 四. 讨论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 附表1 引物序列 | 第45-46页 |
| 附录2 培养基、试剂配方及贮存 | 第46-48页 |
| 附录3 实验方法与操作 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
