中文摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
1 前言 | 第11-33页 |
1.1 核酸酶的分类、功能与催化机制 | 第11-23页 |
1.1.1 核酸酶研究概况 | 第11-12页 |
1.1.2 核酸分解反应 | 第12-15页 |
1.1.2.1 核酸分解反应的化学基础 | 第12-13页 |
1.1.2.2 亲核攻击底物 | 第13-14页 |
1.1.2.3 核酸酶底物 | 第14页 |
1.1.2.4 磷酸键剪切产物 | 第14-15页 |
1.1.3 核酸酶多样性以及分类 | 第15-18页 |
1.1.3.1 核酸酶在结构、催化机制和生物学功能的联系上缺乏统一性 | 第16页 |
1.1.3.2 核酸酶活性相关二价阳离子基本特性 | 第16-18页 |
1.1.3.3 催化机制存在特异性的核酸酶 | 第18页 |
1.1.4 根据金属离子依赖性对核酸酶进行分类 | 第18-23页 |
1.1.4.1 双金属离子依赖催化机制 | 第19-22页 |
1.1.4.2 单金属离子依赖催化机制 | 第22页 |
1.1.4.3 金属离子不依赖催化机制 | 第22-23页 |
1.2 高等植物中核酸酶研究概况 | 第23-32页 |
1.2.1 高等植物中核酸降解的意义 | 第23-27页 |
1.2.1.1 DNA降解与叶片衰老 | 第24页 |
1.2.1.2 DNA降解与植物营养 | 第24-25页 |
1.2.1.3 核酸降解与生物胁迫 | 第25页 |
1.2.1.4 核酸降解与植物发育 | 第25-26页 |
1.2.1.5 核酸降解与非生物胁迫 | 第26-27页 |
1.2.2 DNA降解相关核酸酶 | 第27-30页 |
1.2.2.1 DNA核酸内切酶 | 第27-29页 |
1.2.2.2 DNA核酸外切酶 | 第29-30页 |
1.2.3 RNA降解相关核酸酶 | 第30-31页 |
1.2.4 核酸酶鉴定方法 | 第31-32页 |
1.3 研究目的与意义 | 第32-33页 |
2 材料与方法 | 第33-43页 |
2.1 实验材料 | 第33-37页 |
2.1.1 植物材料 | 第33页 |
2.1.2 酶与各种生化试剂 | 第33页 |
2.1.3 引物 | 第33-37页 |
2.2 实验方法 | 第37-43页 |
2.2.1 植物材料的处理 | 第37页 |
2.2.2 TRIzol法提取RNA | 第37-38页 |
2.2.3 cDNA的获得 | 第38-39页 |
2.2.3.1 RNA中基因组DNA的去除 | 第38页 |
2.2.3.2 RNA反转录 | 第38-39页 |
2.2.4 qRT-PCR | 第39-40页 |
2.2.4.1 qRT-PCR引物设计 | 第39页 |
2.2.4.2 qRT-PCR反应体系 | 第39页 |
2.2.4.3 qRT-PCR反应条件 | 第39-40页 |
2.2.5 拟南芥基因组DNA提取(小量法) | 第40页 |
2.2.6 PCR鉴定突变体纯合植株 | 第40-41页 |
2.2.6.1 植物材料获得 | 第40页 |
2.2.6.2 三引物法鉴定原理 | 第40-41页 |
2.2.6.3 PCR鉴定反应体系及反应条件 | 第41页 |
2.2.7 生物信息学分析 | 第41-43页 |
2.2.7.1 蛋白基本信息预测 | 第41页 |
2.2.7.2 构建系统发育树 | 第41-42页 |
2.2.7.3 基因结构绘制 | 第42页 |
2.2.7.4 染色体定位分析 | 第42页 |
2.2.7.5 基因表达模式预测 | 第42-43页 |
3 结果与分析 | 第43-68页 |
3.1 拟南芥中DNase和RNase基因预测 | 第43-48页 |
3.1.1 拟南芥中DNase基因预测 | 第43-45页 |
3.1.2 拟南芥中RNase基因预测 | 第45-48页 |
3.2 拟南芥中DNase和RNase基本生化特性分析 | 第48-52页 |
3.2.1 拟南芥中DNase理化特性分析 | 第48-50页 |
3.2.2 拟南芥中RNase理化特性分析 | 第50-52页 |
3.3 拟南芥中DNase和RNase家族进化关系及基因结构分析 | 第52-54页 |
3.3.1 拟南芥中DNase家族进化关系及基因结构分析 | 第52-53页 |
3.3.2 拟南芥中RNase家族进化关系及基因结构分析 | 第53-54页 |
3.4 拟南芥中DNase和RNase基因染色体定位分析 | 第54-56页 |
3.4.1 拟南芥中DNase基因染色体定位分析 | 第54-55页 |
3.4.2 拟南芥中RNase基因染色体定位分析 | 第55-56页 |
3.5 拟南芥中DNase和RNase基因表达模式预测 | 第56-58页 |
3.5.1 拟南芥中DNase基因表达模式预测 | 第56-57页 |
3.5.2 拟南芥中RNase基因表达模式预测 | 第57-58页 |
3.6 拟南芥中DNase和RNase基因逆境胁迫诱导表达检测 | 第58-64页 |
3.6.1 拟南芥中DNase基因逆境胁迫诱导表达检测 | 第58-61页 |
3.6.2 拟南芥中RNase基因逆境胁迫诱导表达检测 | 第61-64页 |
3.7 拟南芥中DNase和RNase基因突变体筛选 | 第64-66页 |
3.7.1 拟南芥中DNase基因突变体筛选 | 第64-65页 |
3.7.2 拟南芥中RNase基因突变体筛选 | 第65-66页 |
3.8 拟南芥中DNase和RNase突变体抗逆表型鉴定 | 第66-68页 |
4 讨论 | 第68-71页 |
4.1 拟南芥中DNase及RNase蛋白基本生化特性 | 第68-69页 |
4.2 拟南芥中DNase及RNase基因与生长发育 | 第69-70页 |
4.3 拟南芥中DNase及RNase基因与逆境胁迫相应 | 第70-71页 |
5 结论 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-81页 |
致谢 | 第81页 |