| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 PRRS概述 | 第11页 |
| 1.2 PRRSV基因组结构 | 第11页 |
| 1.3 PRRS的致病机理 | 第11-12页 |
| 1.4 PRRSV感染的临床症状 | 第12页 |
| 1.5 PRRSV的传播 | 第12-13页 |
| 1.6 PRRSV NSP1的结构与功能 | 第13页 |
| 1.7 PRRSV NSP2的结构与功能 | 第13-14页 |
| 1.8 PRRSV的主要结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.9 PRRSV的检测手段 | 第15-16页 |
| 1.9.1 酶联免疫吸附实验 | 第15页 |
| 1.9.2 反转录-聚合酶链反应 | 第15页 |
| 1.9.3 间接免疫荧光实验 | 第15-16页 |
| 1.9.4 血清中和实验 | 第16页 |
| 1.9.5 原位杂交技术 | 第16页 |
| 1.9.6 环介导等温扩增技术 | 第16页 |
| 1.10 PRRSV疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| 1.11 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 PRRSV EF2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 质粒、载体与主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 血清样本 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第19页 |
| 2.2.2 重组质粒pET-28a-EF2的构建 | 第19-22页 |
| 2.2.3 EF2蛋白的表达 | 第22-24页 |
| 2.2.4 EF2蛋白的纯化与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 EF2蛋白间接ELISA方法的建立 | 第25-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 目的片段的扩增 | 第27页 |
| 2.3.2 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.3 EF2蛋白的表达 | 第27-29页 |
| 2.3.4 EF2蛋白的纯化及Western blot检测分析 | 第29页 |
| 2.3.5 重组蛋白最佳包被浓度以及最佳血清稀释度的确定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 抗原抗体作用时间的选定 | 第30页 |
| 2.3.7 酶标抗体最佳稀释度的确定 | 第30-31页 |
| 2.3.8 重复性实验 | 第31-32页 |
| 2.3.9 阴阳性临界值的确定 | 第32页 |
| 2.3.10 特异性分析结果 | 第32页 |
| 2.3.11 敏感性分析结果 | 第32页 |
| 2.3.12 符合性实验结果 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 GD2蛋白的诱导表达及单克隆抗体制备 | 第36-41页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 基因合成 | 第36页 |
| 3.2.2 GD2蛋白的表达 | 第36页 |
| 3.2.3 GD2蛋白表达的形式确定 | 第36-37页 |
| 3.2.4 GD2蛋白的纯化与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 GD2蛋白的纯化及Western blot检测分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 单克隆抗体鉴定结果 | 第39页 |
| 3.3.3 单克隆抗体的Western blot检测 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 全文结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
