| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第10-18页 |
| 1 绪论 | 第18-32页 |
| 1.1 青蒿素的生物合成途径 | 第18-20页 |
| 1.2 提高青蒿素含量的主要策略 | 第20-25页 |
| 1.2.1 打破生物合成途径限速步骤提高青蒿素含量 | 第20-21页 |
| 1.2.2 阻断分支代谢途径促进了青蒿素的积累 | 第21页 |
| 1.2.3 非青蒿素合成途径基因对青蒿素合成的影响 | 第21页 |
| 1.2.4 转录因子调控青蒿素生物合成 | 第21-23页 |
| 1.2.5 激素、生物/非生物诱导子对青蒿素合成的影响 | 第23-25页 |
| 1.2.6 青蒿素合成生物学研究进展 | 第25页 |
| 1.3 MEP途径第一个关键酶DXS的研究进展 | 第25-29页 |
| 1.3.1 DXS在植物生长发育过程中的作用 | 第26页 |
| 1.3.2 DXS对次生代谢产物合成的影响 | 第26-27页 |
| 1.3.3 DXS基因家族成员的功能分化 | 第27页 |
| 1.3.4 DXS蛋白结构与调控机制 | 第27-28页 |
| 1.3.5 青蒿素前体合成依赖于MEP途径 | 第28-29页 |
| 1.4 课题的研究目的意义、研究内容及技术路线 | 第29-32页 |
| 1.4.1 课题的研究目的与意义 | 第29页 |
| 1.4.2 课题的研究内容 | 第29-30页 |
| 1.4.3 课题研究的技术路线 | 第30-32页 |
| 2 青蒿DXS基因家族克隆与分析 | 第32-66页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料、试剂与设备 | 第33-39页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第33页 |
| 2.2.2 菌株与质粒 | 第33页 |
| 2.2.3 试剂及药品 | 第33-38页 |
| 2.2.4 仪器与设备 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-53页 |
| 2.3.1 植物材料处理 | 第39页 |
| 2.3.2 青蒿总RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.3.3 青蒿总RNA合成第一链cDNA | 第40-41页 |
| 2.3.4 青蒿DXS基因家族成员EST序列查找与分析 | 第41-42页 |
| 2.3.5 常用分子克隆技术 | 第42-46页 |
| 2.3.6 RACE技术扩增DXS基因家族全长 | 第46-50页 |
| 2.3.7 生物信息学分析 | 第50页 |
| 2.3.8 亚细胞定位分析 | 第50-53页 |
| 2.4 结果与分析 | 第53-63页 |
| 2.4.1 AaDXS基因家族EST序列获得 | 第53页 |
| 2.4.2 AaDXS基因家族cDNA全长的获得 | 第53-58页 |
| 2.4.3 AaDXS基因家族生物信息学分析 | 第58-62页 |
| 2.4.4 DXS基因家族亚细胞定位 | 第62-63页 |
| 2.5 讨论 | 第63-64页 |
| 2.6 本章小结 | 第64-66页 |
| 3 青蒿稳定内参基因的筛选与验证 | 第66-84页 |
| 3.1 引言 | 第66页 |
| 3.2 实验材料 | 第66-67页 |
| 3.3 实验方法 | 第67-72页 |
| 3.3.1 植物材料处理 | 第67页 |
| 3.3.2 总RNA的提取和cDNA制备 | 第67-68页 |
| 3.3.3 候选内参基因的选择与引物设计 | 第68页 |
| 3.3.4 PCR扩增及产物测序 | 第68-69页 |
| 3.3.5 qPCR | 第69页 |
| 3.3.6 geNorm和NormFinder分析 | 第69-72页 |
| 3.3.7 内参基因稳定性验证 | 第72页 |
| 3.3.8 数据分析 | 第72页 |
| 3.4 结果与分析 | 第72-81页 |
| 3.4.1 扩增效率和Cq值变化 | 第72-73页 |
| 3.4.2 geNorm分析结果 | 第73-76页 |
| 3.4.3 qPCR所需最少内参基因分析结果 | 第76页 |
| 3.4.4 NormFinder分析结果 | 第76-79页 |
| 3.4.5 内参基因稳定性验证 | 第79-81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-83页 |
| 3.6 本章小结 | 第83-84页 |
| 4 青蒿DXS基因家族表达模式分析 | 第84-108页 |
| 4.1 引言 | 第84-85页 |
| 4.2 材料、设备与试剂 | 第85-87页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第85页 |
| 4.2.2 微生物与质粒 | 第85-86页 |
| 4.2.3 试剂与培养基 | 第86-87页 |
| 4.2.4 仪器与设备 | 第87页 |
| 4.3 实验方法 | 第87-93页 |
| 4.3.1 植物培养与处理 | 第87页 |
| 4.3.2 青蒿核酸提取和cDNA合成 | 第87-88页 |
| 4.3.3 DXS基因家族组织表达模式分析 | 第88-89页 |
| 4.3.4 DXS基因家族响应非生物诱导表达模式分析 | 第89页 |
| 4.3.5 基于FPNI-PCR方法克隆目的基因启动子 | 第89-92页 |
| 4.3.6 启动子序列分析 | 第92页 |
| 4.3.7 载体构建与拟南芥转化 | 第92-93页 |
| 4.3.8 GUS组织化学染色分析 | 第93页 |
| 4.3.9 数据分析 | 第93页 |
| 4.4 结果与分析 | 第93-104页 |
| 4.4.1 青蒿DXS基因家族组织表达模式分析 | 第93-95页 |
| 4.4.2 青蒿DXS基因家族诱导表达模式分析 | 第95-100页 |
| 4.4.3 青蒿DXS基因启动子克隆与序列分析 | 第100-103页 |
| 4.4.4 青蒿AaDXS3基因启动子组织表达模式分析 | 第103-104页 |
| 4.5 讨论 | 第104-107页 |
| 4.6 本章小结 | 第107-108页 |
| 5 冷胁迫促进青蒿素合成的分子机制 | 第108-124页 |
| 5.1 引言 | 第108-109页 |
| 5.2 材料、试剂与设备 | 第109-110页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第109页 |
| 5.2.2 试剂及药品 | 第109页 |
| 5.2.3 仪器与设备 | 第109-110页 |
| 5.3 实验方法 | 第110-113页 |
| 5.3.1 植物材料培养处理 | 第110页 |
| 5.3.2 冷冻抗性实验 | 第110页 |
| 5.3.3 青蒿中内源JA水平测定 | 第110-111页 |
| 5.3.4 RNA提取及基因表达分析 | 第111-112页 |
| 5.3.5 青蒿素及相关代谢产物HPLC分析 | 第112-113页 |
| 5.3.6 数据统计分析 | 第113页 |
| 5.4 结果与分析 | 第113-119页 |
| 5.4.1 添加外源MeJA对青蒿幼苗抗冻性的影响 | 第113-114页 |
| 5.4.2 低温胁迫对JA生物合成途径基因表达及JA水平的影响 | 第114-116页 |
| 5.4.3 低温胁迫对青蒿转录因子表达的影响 | 第116-117页 |
| 5.4.4 低温胁迫对青蒿素生物合成途径结构基因表达的影响 | 第117-118页 |
| 5.4.5 低温胁迫对青蒿素及其代谢产物合成的影响 | 第118-119页 |
| 5.5 讨论 | 第119-122页 |
| 5.6 本章小结 | 第122-124页 |
| 6 结论与展望 | 第124-128页 |
| 6.1 主要结论 | 第124-126页 |
| 6.2 展望 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-148页 |
| 附录 | 第148-149页 |
| A.作者在攻读学位期间研究的其他工作 | 第148页 |
| B. 作者攻读学位期间发表的论文目录 (2010-2016) | 第148-149页 |
| C. 作者攻读学位期间主持和参加科研项目情况 | 第149页 |
