| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 冠状病毒 | 第13-15页 |
| 1.1.1 冠状病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 冠状病毒的结构 | 第14-15页 |
| 1.2 猪流行性腹泻病毒 | 第15-18页 |
| 1.2.1 基因组结构 | 第16页 |
| 1.2.2 基因组复制 | 第16页 |
| 1.2.3 编码的蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| 1.2.4 细胞培养特性 | 第17-18页 |
| 1.2.5 理化特性 | 第18页 |
| 1.2.6 组织嗜性和免疫 | 第18页 |
| 1.3 猪流行性腹泻 | 第18-20页 |
| 1.3.1 流行病学 | 第18-19页 |
| 1.3.2 临床症状及剖检变化 | 第19页 |
| 1.3.3 发病机理 | 第19页 |
| 1.3.4 诊断与防治 | 第19-20页 |
| 1.4 冠状病毒附属基因的研究 | 第20-21页 |
| 1.5 PEDV附属基因ORF3的研究 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白重组质粒的构建 | 第24-53页 |
| 2.1 材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.3 分子生物学分析软件 | 第25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-48页 |
| 2.2.1 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3引物设计的原理 | 第28-29页 |
| 2.2.2 ORF3蛋白序列分析比对 | 第29-30页 |
| 2.2.3 引物的稀释 | 第30页 |
| 2.2.4 常用试剂的配置 | 第30页 |
| 2.2.5 p EGFP-C1载体的线性化 | 第30-31页 |
| 2.2.6 不同ORF3片段同源臂的扩增 | 第31-41页 |
| 2.2.6.1 ORF3（1-225aa）片段同源臂的扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 ORF3（1-173aa）片段同源臂的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 ORF3（174-225aa）片段同源臂的扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.6.4 ORF3（1-91aa）片段同源臂的扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.6.5 ORF3（92-173aa）片段同源臂的扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.6.6 ORF3（1-39aa）片段同源臂的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.6.7 ORF3（40-91aa）片段同源臂的扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.6.8 ORF3（1-39+92-225aa）片段同源臂的扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.6.9 ORF3（40-63aa）片段同源臂的扩增 | 第39页 |
| 2.2.6.10 ORF3（64-74aa）片段同源臂的扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.6.11 ORF3（75-91aa）片段同源臂的扩增 | 第40页 |
| 2.2.6.12 ORF3（40-74aa）片段同源臂的扩增 | 第40页 |
| 2.2.6.13 ORF3（64-91aa）片段同源臂的扩增 | 第40页 |
| 2.2.6.14 ORF3（40-63+75-91aa）片段同源臂的扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.7 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3的构建 | 第41-47页 |
| 2.2.7.1 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-225aa）的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.7.2 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-173aa）的构建 | 第42页 |
| 2.2.7.3 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（174-225aa）的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.7.4 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-91aa）的构建 | 第43页 |
| 2.2.7.5 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（92-173aa）的构建 | 第43页 |
| 2.2.7.6 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-39aa）的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.7.7 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-91aa）的构建 | 第44页 |
| 2.2.7.8 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-39+92-225aa）的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.7.9 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-63aa）的构建 | 第45页 |
| 2.2.7.10 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（64-74aa）的构建 | 第45页 |
| 2.2.7.11 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（75-91aa）的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.7.12 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-74aa）的构建 | 第46页 |
| 2.2.7.13 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（64-91aa）的构建 | 第46页 |
| 2.2.7.14 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-63+75-91aa）的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.8 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.3 结果 | 第48-51页 |
| 2.3.1 DR13和CV777 ORF3蛋白序列比对分析 | 第48页 |
| 2.3.2 14 个重组质粒的鉴定 | 第48-51页 |
| 2.3.2.1 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.3.2.2 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-173aa） 和p EGFP-PEDV-ORF3（174-225aa）的鉴定 | 第49页 |
| 2.3.2.3 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-91aa） 和p EGFP-PEDV-ORF3（92-173aa）的鉴定 | 第49-50页 |
| 2.3.2.4 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（1-39aa）、p EGFP-PEDV-ORF3（40-91aa）和p EGFP-PEDV-ORF3（1-39+92-225aa）的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.2.5 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-63aa）、p EGFP-PEDV-ORF3（64-74aa）和p EGFP-PEDV-ORF3（75-91aa）的鉴定 | 第51页 |
| 2.3.2.6 重组质粒p EGFP-PEDV-ORF3（40-74aa）、p EGFP-PEDV-ORF3（64-91aa）和p EGFP-PEDV-ORF3（40-63+75-91aa）的鉴定 | 第51页 |
| 2.4 小结 | 第51-53页 |
| 第三章 猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白在细胞内的定位 | 第53-67页 |
| 3.1 材料 | 第53-54页 |
| 3.1.1 细胞及质粒 | 第53页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第53-54页 |
| 3.2 方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 常用试剂的配制 | 第54页 |
| 3.2.2 细胞的复苏 | 第54-55页 |
| 3.2.3 细胞的传代 | 第55页 |
| 3.2.4 转染 | 第55-57页 |
| 3.2.5 染核 | 第57页 |
| 3.3 结果 | 第57-63页 |
| 3.3.1 细胞的传代 | 第57页 |
| 3.3.2 LCM观察融合蛋白的定位 | 第57-63页 |
| 3.4 小结 | 第63-67页 |
| 第四章 创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 本人在研究生期间科研成果 | 第75页 |
