| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| 1.1 植物的叶绿体发育 | 第10-19页 |
| 1.1.1 叶绿体的形态与结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 叶绿体发育过程及相关的基因调控 | 第12-15页 |
| 1.1.2.1 细胞对外界环境刺激的响应 | 第12页 |
| 1.1.2.2 核基因和叶绿体基因相关的转录和翻译 | 第12-13页 |
| 1.1.2.3 核质基因之间的正反向信号调控 | 第13-14页 |
| 1.1.2.4 核基因编码蛋白向叶绿体的转运和输入 | 第14页 |
| 1.1.2.5 类囊体系统的形成和组装 | 第14-15页 |
| 1.1.3 叶绿体的半自主性 | 第15-19页 |
| 1.1.3.1 叶绿体基因组的结构和特点 | 第15页 |
| 1.1.3.2 叶绿体基因组的表达产物 | 第15-16页 |
| 1.1.3.3 叶绿体基因的表达体系与调控 | 第16-18页 |
| 1.1.3.4 质体基因表达过程的必需基因 | 第18-19页 |
| 1.2 PALE CRESS基因研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 pale cress突变体研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.1.1 pac突变体的质体发育受阻 | 第20页 |
| 1.2.1.2 pac突变体叶片细胞发育模式异常 | 第20-21页 |
| 1.2.1.3 pac突变体的光合色素缺陷 | 第21-22页 |
| 1.2.2 PAC基因表达调控和产物 | 第22页 |
| 1.2.3 PAC缺陷对核质基因表达的影响 | 第22-23页 |
| 1.2.4 PAC基因功能初步分析 | 第23-24页 |
| 1.3 酵母双杂交技术 | 第24-27页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统的作用原理和构成 | 第25-26页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统在研究蛋白互作中的优势 | 第26页 |
| 1.3.3 酵母双杂交系统的缺点及其应对 | 第26-27页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第27页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 PAC互作蛋白的筛选 | 第28-44页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 植物幼苗 | 第28页 |
| 2.2.2 菌株 | 第28页 |
| 2.2.2.1 酵母菌株 | 第28页 |
| 2.2.2.2 细菌菌株 | 第28页 |
| 2.2.3 质粒载体 | 第28页 |
| 2.2.4 溶液和试剂 | 第28-30页 |
| 2.2.5 PAC蛋白的亚细胞定位 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 拟南芥原生质体的制备 | 第30页 |
| 2.2.5.2 原生质体的瞬时转化与荧光观察 | 第30-31页 |
| 2.2.6 PAC互作蛋白的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 诱饵载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.6.2 诱饵蛋白的自激活和毒性检测 | 第31-32页 |
| 2.2.6.3 阳性对照与阴性对照 | 第32页 |
| 2.2.6.4 拟南芥幼苗cDNA文库构建 | 第32页 |
| 2.2.6.5 互作蛋白的大规模筛选 | 第32页 |
| 2.2.7 筛选结果的分离与鉴定 | 第32-35页 |
| 2.2.7.1 筛选结果的分离 | 第32-33页 |
| 2.2.7.2 捕获蛋白编码基因的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.7.3 互作蛋白的验证 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.3.1 PAC蛋白的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 2.3.2 PAC互作蛋白的筛选 | 第36-40页 |
| 2.3.2.1 PAC-BD载体的构建 | 第36页 |
| 2.3.2.2 PAC蛋白的自激活检测 | 第36-37页 |
| 2.3.2.3 正对照与负对照的检测与验证 | 第37-39页 |
| 2.3.2.4 酵母文库筛选结果 | 第39-40页 |
| 2.3.3 筛选结果的分离和鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.4 互作蛋白的验证 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 PAC蛋白的原核表达和抗体制备 | 第44-54页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 菌株 | 第44页 |
| 3.2.2 载体 | 第44页 |
| 3.2.3 工具酶 | 第44页 |
| 3.2.4 试剂盒与其他材料 | 第44页 |
| 3.2.5 溶液与试剂 | 第44-46页 |
| 3.2.6 原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.6.1 引物设计和PCR扩增 | 第46-47页 |
| 3.2.6.2 载体与PCR产物的酶切与连接 | 第47页 |
| 3.2.6.3 连接产物转化大肠杆菌 | 第47页 |
| 3.2.6.4 细菌质粒的提取 | 第47-48页 |
| 3.2.7 PAC蛋白的原核表达 | 第48-49页 |
| 3.2.7.1 pET28a-PAC的诱导表达 | 第48页 |
| 3.2.7.2 SDS-PAGE电泳检测 | 第48-49页 |
| 3.2.8 重组蛋白His_(x6)-PAC的纯化 | 第49页 |
| 3.2.8.1 His标签蛋白纯化柱富集纯化 | 第49页 |
| 3.2.8.2 电洗脱纯化 | 第49页 |
| 3.2.8.3 BSA浓度梯度检测纯化蛋白浓度 | 第49页 |
| 3.2.9 抗体制备 | 第49-50页 |
| 3.2.9.1 抗血清的制备 | 第49-50页 |
| 3.2.9.2 抗血清的检测验证 | 第50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 重组质粒pET28a-PAC的构建和鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.2 重组质粒pET28a-PAC的原核表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 His_(x6)-PAC蛋白纯化与检测 | 第52-53页 |
| 3.3.4 His_(x6)-PAC抗血清的制备与检测 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 总结与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-66页 |
| 缩略词 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
