| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 脂肪酶综述 | 第9-15页 |
| 1.1.1 脂肪酶的定义与来源 | 第9-10页 |
| 1.1.2 脂肪酶的性质与结构 | 第10-12页 |
| 1.1.3 脂肪酶的工业应用 | 第12-15页 |
| 1.2 蛋白质工程 | 第15-18页 |
| 1.2.1 理性设计 | 第16页 |
| 1.2.2 定向进化 | 第16-18页 |
| 1.3 本课题的研究意义和内容 | 第18-20页 |
| 1.3.1 本课题的立题依据和意义 | 第18-19页 |
| 1.3.2 本课题的研究内容和思路 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-43页 |
| 2.1 材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要酶试剂等 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要配制试剂及培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-43页 |
| 2.2.1 圆弧青霉脂肪酶基因的异源表达 | 第24-28页 |
| 2.2.2 分子改造 | 第28-36页 |
| 2.2.3 野生型与突变体的酶学性质与动力学参数测定 | 第36-40页 |
| 2.2.4 野生型与突变体的催化产物分析 | 第40页 |
| 2.2.5 野生型与突变体的圆二色谱检测 | 第40-41页 |
| 2.2.6 野生型与突变体的荧光光谱检测 | 第41-42页 |
| 2.2.7 野生型与突变体的结构分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-61页 |
| 3.1 基因工程菌的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.1 圆弧青霉脂肪酶基因的获取 | 第43-44页 |
| 3.1.2 工程菌BL21/pET-pcl的构建 | 第44-45页 |
| 3.2 突变体的筛选 | 第45-49页 |
| 3.2.1 定点突变及突变体的筛选 | 第45-48页 |
| 3.2.2 突变体文库的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.3 突变体的筛选 | 第49页 |
| 3.2.4 定点突变及突变体的构建 | 第49页 |
| 3.3 野生型与突变体的酶学性质 | 第49-55页 |
| 3.3.1 野生型与突变体的蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 野生型与突变体的最适温度及温度稳定性 | 第50-53页 |
| 3.3.3 野生型与突变体的最适pH及pH稳定性 | 第53-55页 |
| 3.3.4 野生型与突变体的动力学参数测定 | 第55页 |
| 3.4 野生型与突变体的催化产物分析 | 第55-56页 |
| 3.5 野生型与突变体的圆二色谱分析 | 第56-57页 |
| 3.6 野生型与突变体的荧光光谱分析 | 第57-58页 |
| 3.7 野生型与突变体的结构分析 | 第58-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-72页 |
| 7 攻读学位期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73页 |