致谢 | 第7-10页 |
摘要 | 第10-12页 |
1 文献综述 | 第12-17页 |
1.1 Septin基因家族的研究现状 | 第12-15页 |
1.1.1 Septin蛋白的结构与功能 | 第12-13页 |
1.1.2 真菌Septin基因家族的研究 | 第13-15页 |
1.2 用于真菌遗传改良筛选标记基因的研究现状 | 第15-16页 |
1.3 展望 | 第16-17页 |
2 球孢白僵菌Septin基因家族的功能解析 | 第17-33页 |
2.1 材料 | 第17-18页 |
2.1.1 菌株和载体 | 第17-18页 |
2.1.2 试剂及试剂盒 | 第18页 |
2.2 方法 | 第18-24页 |
2.2.1 真菌DNA提取 | 第18-19页 |
2.2.2 球孢白僵菌septin蛋白家族的鉴定与序列分析 | 第19页 |
2.2.3 Septin单基因敲除与回补株的构建 | 第19-21页 |
2.2.4 Septin基因转录水平分析 | 第21页 |
2.2.5 不同营养基质上的生长速率测定 | 第21-22页 |
2.2.6 产孢量及萌发速率的检测 | 第22页 |
2.2.7 孢子质量的检测 | 第22页 |
2.2.8 菌落生长抗逆力的测定 | 第22-23页 |
2.2.9 分生孢子抗逆力的测定 | 第23页 |
2.2.10 分生孢子毒力的生物测定 | 第23页 |
2.2.11 数据分析 | 第23-24页 |
2.3 结果 | 第24-32页 |
2.3.1 球孢白僵菌BspA-D的基本特征 | 第24-25页 |
2.3.2 单基因敲除对同伴基因转录表达的影响 | 第25-26页 |
2.3.3 bsp基因敲除对菌落生长、产孢、孢子萌发及芽管分隔的影响 | 第26-29页 |
2.3.4 bsp基因敲除对孢子大小、密度及表面结构的影响 | 第29-30页 |
2.3.5 bsp基因敲除对化学胁迫敏感性的影响 | 第30-31页 |
2.3.6 bsp基因敲除对生防潜能的影响 | 第31-32页 |
2.4 讨论 | 第32-33页 |
3 利用球孢白僵菌内源安全标记表达昆虫胃毒蛋白的工程菌构建 | 第33-40页 |
3.1 材料 | 第34页 |
3.1.1 菌株和载体 | 第34页 |
3.1.2 试剂及试剂盒 | 第34页 |
3.2 方法 | 第34-37页 |
3.2.1 载体构建 | 第34-35页 |
3.2.2 ura3缺失株感受态芽生孢子的制备 | 第35-36页 |
3.2.3 质粒的芽生孢子转化 | 第36页 |
3.2.4 转化子的鉴定及转录水平筛选 | 第36-37页 |
3.2.5 转化子的酶联免疫吸附测定 | 第37页 |
3.3 结果与讨论 | 第37-40页 |
3.3.1 双元载体及转化子的PCR鉴定 | 第37-38页 |
3.3.2 被导入目标基因及其编码蛋白的表达达水平 | 第38-40页 |
4 结语 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-47页 |
Summary | 第47-48页 |
附录:攻读硕士学位期间的主要成果 | 第49页 |