| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写词表 | 第10-13页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 实验菌株及质粒 | 第21页 |
| 1.1.2 细胞、实验动物、自备抗体 | 第21页 |
| 1.1.3 主要工具酶及试剂盒 | 第21-22页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第22页 |
| 1.2 方法 | 第22-36页 |
| 1.2.1 原核表达载体的构建 | 第22-24页 |
| 1.2.2 真核表达载体的构建 | 第24页 |
| 1.2.3 pCold-cSP-A融合蛋白的诱导表达 | 第24-25页 |
| 1.2.4 pCold-cSPA诱导表达产物的纯化 | 第25页 |
| 1.2.5 蛋白质免疫印迹法（Western-blotting）鉴定重组蛋白 | 第25-26页 |
| 1.2.6 鸡肺灌洗液的制备天然SP-A蛋白的制备与纯化 | 第26页 |
| 1.2.7 抑菌活性检测 | 第26页 |
| 1.2.8 单克隆抗体的制备 | 第26-28页 |
| 1.2.9 单克隆抗体效价测定及生物活性分析 | 第28-29页 |
| 1.2.10 抗cSP-A蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定 | 第29-31页 |
| 1.2.11 荧光定量RT-PCR检测鸡相关组织cSP-A的mRNA表达水平 | 第31-33页 |
| 1.2.12 动物攻毒实验 | 第33-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-62页 |
| 2.1 cSP-A蛋白的可溶性表达与鉴定 | 第36-38页 |
| 2.1.1 原核表达载体构建 | 第36页 |
| 2.1.2 重组蛋白的表达和纯化结果 | 第36-37页 |
| 2.1.3 Western Blot分析 | 第37-38页 |
| 2.2 抑菌活性检测 | 第38-39页 |
| 2.3 cSP-A真核表达载体构建 | 第39页 |
| 2.4 单克隆抗体的筛选与亚型鉴定 | 第39页 |
| 2.5 cSP-A蛋白抗原表位的鉴定 | 第39-42页 |
| 2.5.1 cSP-A基因的分段克隆、诱导表达与初步鉴定 | 第39-41页 |
| 2.5.2 1D12A3单克隆抗体抗原表位的精确鉴定 | 第41-42页 |
| 2.6 单克隆抗体的免疫学特性鉴定 | 第42-45页 |
| 2.6.1 单克隆抗体的筛选 | 第42-43页 |
| 2.6.2 ELISA检测 | 第43页 |
| 2.6.3 Western-blotting检测 | 第43页 |
| 2.6.4 间接免疫荧光染色检测 | 第43-44页 |
| 2.6.5 IHC检测 | 第44-45页 |
| 2.7 qRT-PCR结果 | 第45-47页 |
| 2.7.1 标准品梯度稀释的PCR扩增 | 第45页 |
| 2.7.2 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第45页 |
| 2.7.3 溶解曲线的分析 | 第45-46页 |
| 2.7.4 敏感性试验检测 | 第46页 |
| 2.7.5 正常鸡不同脏器中cSP-A mRNA表达水平 | 第46-47页 |
| 2.8 鸡攻毒实验 | 第47-62页 |
| 2.8.1 各攻毒组中cSP-A在各脏器中表达水平的变化 | 第47-48页 |
| 2.8.2 病理组织学观察 | 第48-55页 |
| 2.8.3 cSP-A蛋白表达水平的结果 | 第55-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 3.1 鸡SP-A的可溶性表达、纯化与活性检测 | 第62-63页 |
| 3.2 单抗的表位及免疫学特性 | 第63页 |
| 3.3 cSP-A在健康鸡中组织分布情况 | 第63-64页 |
| 3.4 鸡SP-A可作为病理损伤的检测指标 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
| 附作者在读研期间发表的学术论文 | 第72页 |
