| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 木聚糖酶 | 第9-11页 |
| 1.1.1 木聚糖酶简介 | 第9页 |
| 1.1.2 木聚糖酶的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 木聚糖酶的制备 | 第10-11页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第11-13页 |
| 1.2.1 P. pastoris表达系统简介 | 第11页 |
| 1.2.2 提高P. pastoris外源蛋白表达的策略 | 第11-13页 |
| 1.3 立题依据及意义 | 第13-14页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 菌种及药品 | 第15页 |
| 2.2 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.3 分子生物学操作 | 第16-19页 |
| 2.3.1 PCR扩增木聚糖酶基因 | 第16-17页 |
| 2.3.2 PCR扩增二硫键异构酶pdi基因 | 第17页 |
| 2.3.3 大肠杆菌E.coli JM109感受态制备及转化 | 第17-18页 |
| 2.3.4 大肠杆菌质粒提取 | 第18页 |
| 2.3.5 重组表达载体pPIC3.5K-xynAS与pPIC9K-xynA构建及鉴定 | 第18页 |
| 2.3.6 重组表达载体pPICZ A-pdi的构建与筛选 | 第18页 |
| 2.3.7 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| 2.3.8 重组菌的构建与筛选 | 第19页 |
| 2.4 细胞培养 | 第19-21页 |
| 2.4.1 培养基 | 第19-20页 |
| 2.4.2 培养方法 | 第20-21页 |
| 2.5 分析方法 | 第21页 |
| 2.5.1 生物量的测定 | 第21页 |
| 2.5.2 木聚糖酶酶活测定 | 第21页 |
| 2.5.3 蛋白质浓度的测定 | 第21页 |
| 2.5.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第21页 |
| 2.6 重组木聚糖酶Xyn A的纯化 | 第21-22页 |
| 2.7 木聚糖在馒头制作中的应用 | 第22-23页 |
| 2.7.1 馒头的制作过程 | 第22页 |
| 2.7.2 馒头相对比容的测定 | 第22页 |
| 2.7.3 馒头硬度的测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-42页 |
| 3.1 Streptomyces sp. FA1木聚糖酶克隆、表达、酶学性质 | 第23-29页 |
| 3.1.1 重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| 3.1.2 重组菌的构建及筛选 | 第25-26页 |
| 3.1.3 重组木聚糖酶的纯化 | 第26-27页 |
| 3.1.4 重组木聚糖酶的最适pH及pH稳定性 | 第27-28页 |
| 3.1.5 重组木聚糖酶的最适温度及温度稳定性 | 第28页 |
| 3.1.6 金属离子对重组木聚糖酶的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.7 动力学参数测定 | 第29页 |
| 3.2 重组菌P. pastoris KM71/pPIC9K-xynA的 3.6 L罐高密度发酵 | 第29-33页 |
| 3.2.1 诱导温度对Xyn A产量的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.2 初始诱导细胞浓度对XynA产量的影响 | 第30-32页 |
| 3.2.3 诱导阶段维持甲醇浓度对XynA产量的影响 | 第32-33页 |
| 3.3 P. pastoris二硫键异构酶基因的克隆与表达 | 第33-40页 |
| 3.3.1 P. pastoris基因组的提取 | 第34页 |
| 3.3.2 pdi基因的PCR扩增以及重组表达载体pPICZ A-pdi的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.3 重组P. pastoris KM71/pPIC9K-xynA/pPICZ A-pdi的构建和筛选 | 第35页 |
| 3.3.4 重组P. pastoris KM71/pPIC9K-xynA/pPICZ A-pdi的表达验证 | 第35-36页 |
| 3.3.5 P. pastoris KM71/pPIC9K-xynA/pPICZ A-pdi 3.6 L罐发酵优化 | 第36-40页 |
| 3.4 重组木聚糖酶在馒头制作中的应用 | 第40-42页 |
| 3.4.1 重组木聚糖酶对馒头相对比容的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.2 重组木聚糖酶对馒头硬度的影响 | 第41-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
