| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-13页 |
| 1.1 本文的主要工作 | 第10-11页 |
| 1.2 蛋白酶体代谢调节的国内外研究历史与现状 | 第11页 |
| 1.3 本文的主要创新 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文的结构安排 | 第12-13页 |
| 第二章 糖原合成激酶与蛋白酶体的结构和功能 | 第13-17页 |
| 2.1 糖原合成激酶的结构和功能 | 第13-14页 |
| 2.2 蛋白酶体的结构与功能 | 第14-15页 |
| 2.3 本章小结 | 第15-17页 |
| 第三章 糖原合成激酶在细胞细胞内抑制蛋白酶体的活性 | 第17-41页 |
| 3.1 材料试剂与实验仪器 | 第17-22页 |
| 3.1.1 材料试剂 | 第17-19页 |
| 3.1.2 试剂配制 | 第19-21页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 3.2.1 NRK细胞传代培养/293T细胞培养 | 第22页 |
| 3.2.2 细胞冻存、复苏 | 第22页 |
| 3.2.3 细胞给药 | 第22页 |
| 3.2.4 核提取物提取 | 第22-23页 |
| 3.2.5 蛋白酶体肽酶活性检测 | 第23页 |
| 3.2.6 全蛋白提取 | 第23页 |
| 3.2.7 Wester blotting检测Ubiquitin蛋白表达 | 第23-25页 |
| 3.2.8 GFP-CL1质粒转化 | 第25页 |
| 3.2.9 GFP-CL1质粒提取 | 第25页 |
| 3.2.10 GFP-CL1质粒转染 | 第25-26页 |
| 3.2.11 293T细胞内的GFP荧光强度检测 | 第26页 |
| 3.2.12 糖原合成激酶体外抑制GFP-CL1的降解时间梯度实验 | 第26-27页 |
| 3.2.13 质粒鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2.14 突变质粒转化及质粒提取 | 第28页 |
| 3.2.15 突变质粒转染 | 第28页 |
| 3.2.16 糖原合成激酶对细胞内核提取物的蛋白酶体活性检测 | 第28页 |
| 3.2.17 Western blotting检测细胞内糖原合成激酶β蛋白表达量 | 第28-29页 |
| 3.2.18 293T细胞转染混合脂质体 1、混合脂质体 2 | 第29页 |
| 3.2.19 提取转染后的细胞内全蛋白 | 第29页 |
| 3.2.20 检测糖原合成激酶对核提取物内完整蛋白酶体降解肽酶活性 | 第29-30页 |
| 3.2.21 数据处理 | 第30页 |
| 3.3 结果 | 第30-36页 |
| 3.3.1 糖原合成激酶β抑制剂促进核提取物肽酶活性 | 第30-31页 |
| 3.3.2 糖原合成激酶β抑制剂促进细胞内泛素化蛋白降解 | 第31-32页 |
| 3.3.3 糖原合成激酶β抑制剂促进细胞内完整蛋白酶体降解 | 第32-33页 |
| 3.3.4 糖原合成激酶表达提高抑制核提取物内蛋白肽酶活性 | 第33-35页 |
| 3.3.5 糖原合成激酶抑制细胞细胞内完整蛋白酶体降解活性 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 糖原合成激酶在体外抑制蛋白酶体的活性 | 第41-48页 |
| 4.1 材料试剂 | 第41-42页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.2 试剂配制 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 糖原合成激酶蛋白体外对SP1的降解活性的检测 | 第42页 |
| 4.2.2 糖原合成激酶蛋白对核提取物蛋白酶体活性检测 | 第42页 |
| 4.2.3 糖原合成激酶对纯化的蛋白酶体活性检测 | 第42-43页 |
| 4.3 结果 | 第43-45页 |
| 4.3.1 糖原合成激酶蛋白体外抑制SP1的降解活性 | 第43页 |
| 4.3.2 糖原合成激酶蛋白抑制核提取物的蛋白酶体活性 | 第43-44页 |
| 4.3.3 糖原合成激酶对纯化蛋白酶体活性 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第五章 糖原合成激酶抑制蛋白酶体活性的逆转磷酸化蛋白 | 第48-57页 |
| 5.1 蛋白酶体磷酸化蛋白 | 第48页 |
| 5.2 PP1A的结构与功能 | 第48-49页 |
| 5.3 材料 | 第49页 |
| 5.4 方法 | 第49-50页 |
| 5.4.1 PP1A处理核提取物蛋白酶体活性检测 | 第49页 |
| 5.4.2 PP1A处理纯化的 20S、26S蛋白酶体活性检测方法 | 第49-50页 |
| 5.4.4 PP1A和纯化GSK-3 蛋白一起检测核提取物蛋白酶体活性 | 第50页 |
| 5.4.5 PP1A和纯化GSK-3 蛋白一起检测纯化蛋白酶体活性 | 第50页 |
| 5.5 结果 | 第50-54页 |
| 5.5.1 PP1A体外促进核提取物的蛋白酶体活性 | 第50-51页 |
| 5.5.2 PP1A对 20S蛋白酶体活性无显著性差异 | 第51-52页 |
| 5.5.3 PP1A促进 26S蛋白酶体的胰蛋白酶体活性 | 第52页 |
| 5.5.4 PP1A可逆转糖原合成激酶抑制核提取物的蛋白酶体活性 | 第52-54页 |
| 5.5.5 PP1A和糖原合成激酶一起作用 26S蛋白酶体 | 第54页 |
| 5.6 讨论 | 第54-56页 |
| 5.7 本章小结 | 第56-57页 |
| 第六章 结论与展望 | 第57-61页 |
| 6.1 本文的主要贡献 | 第57-59页 |
| 6.2 下一步的工作展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 读硕士期间取得的成果 | 第71-72页 |
