| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 第一节 蛋白质相互作用的研究 | 第13-21页 |
| 一、蛋白质组学的诞生 | 第13-14页 |
| 二、蛋白质的结构与功能 | 第14-15页 |
| (一) 折叠蛋白质的功能 | 第14页 |
| (二) 无序蛋白质的功能 | 第14-15页 |
| (三) 蛋白质的时空表达特性 | 第15页 |
| 三、蛋白质相互作用的研究 | 第15-16页 |
| 四、蛋白质相互作用的研究方法 | 第16-20页 |
| (一) 高通量检测蛋白质相互作用的技术 | 第16-18页 |
| 1、酵母双杂交系统 | 第16-17页 |
| 2、细菌双杂交系统 | 第17页 |
| 3、蛋白质芯片技术 | 第17-18页 |
| (二) 小规模研究蛋白质相互作用的技术 | 第18-19页 |
| 1、荧光能量转移技术(FRET) | 第18页 |
| 2、免疫共沉淀技术 | 第18页 |
| 3、双分子荧光互补技术(BiFC) | 第18-19页 |
| 4、蛋白质体外结合法(pull down assay) | 第19页 |
| (三) 蛋白质互作的生物信息学检测 | 第19-20页 |
| 五、蛋白质互作的研究意义 | 第20-21页 |
| 第二节 双分子荧光互补技术(BiFC)的发展 | 第21-27页 |
| 一、BiFC技术的概述 | 第21-22页 |
| (一) BiFC技术的研究历史 | 第21页 |
| (二) BiFC技术原理 | 第21-22页 |
| 二、BiFC技术中的荧光蛋白 | 第22-23页 |
| (一) 第一个发展阶段 | 第22页 |
| (二) 第二个发展阶段 | 第22-23页 |
| (三) 第三个发展阶段 | 第23页 |
| 三、荧光蛋白的分割位点 | 第23-24页 |
| 四、BiFC技术的优点 | 第24-25页 |
| 五、BiFC技术的应用 | 第25-27页 |
| (一) 蛋白质相互作用的可视化 | 第25页 |
| (二) 蛋白复合物的亚细胞定位 | 第25-26页 |
| (三) 检测与胞质分裂相关的蛋白质的相互作用 | 第26页 |
| (四) 蛋白质相互作用的支架结构 | 第26-27页 |
| 第二章 小麦凝集素TaJTRL2.1互作蛋白的验证及其表达分析 | 第27-49页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 材料与方法 | 第28-35页 |
| 一、植物材料与处理 | 第28页 |
| 二、双分子荧光互补载体的构建 | 第28-30页 |
| (一) TaJRL2.1-pSPYCE/pSPYNE载体的构建 | 第28-29页 |
| (二) 靶基因-pSPYCE/pSPYNE载体的构建 | 第29页 |
| (三) 阳性和阴性对照载体的构建 | 第29-30页 |
| 三、BSMV沉默载体的构建 | 第30-31页 |
| 四、利用BiFC瞬时转化洋葱表皮 | 第31-32页 |
| (一) 实验材料的准备 | 第31页 |
| (二) 金弹的制备 | 第31-32页 |
| (三) 基因枪共转化 | 第32页 |
| (四) 激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第32页 |
| 五、VIGS体外转录 | 第32-33页 |
| (一) 体外转录物的合成 | 第32-33页 |
| (二) 体外涂抹 | 第33页 |
| 六、RNA的提取和反转录 | 第33-34页 |
| (一) RNA的提取 | 第33-34页 |
| (二) RNA反转录方法 | 第34页 |
| 七、实时定量和半定量RT-PCR | 第34-35页 |
| 八、启动子元件分析 | 第35页 |
| 结果与分析 | 第35-46页 |
| 一、BiFC阳性互作对照的检测 | 第35-36页 |
| 二、TaJRL2.1与不同蛋白之间的相互作用检测 | 第36-41页 |
| (一) TaJRL2.1与乙醇酸氧化酶GLO的相互作用 | 第37页 |
| (二) TaJRL2.1与核酮糖二磷酸羧化酶活化酶RCA的相互作用 | 第37-38页 |
| (三) TaJRL2.1与转录因子WRKY的相互作用 | 第38-39页 |
| (四) TaJRL2.1与蛋白磷酸酶PP2C的相互作用 | 第39-40页 |
| (五) TaJRL2.1与花粉特异性蛋白PLIM-like的相互作用 | 第40页 |
| (六) 其他蛋白与TaJRL2.1的互作鉴定 | 第40-41页 |
| 三、TaJRL2.1互作蛋白的编码基因的组织特异性表达 | 第41页 |
| 四、赤霉菌侵染对TaJRL2.1互作蛋白编码基因的影响 | 第41-43页 |
| 五、TaJRL2.1互作蛋白的编码基因在转基因植株TaJRL2.1-OX和受体亲本PH691中的表达差异 | 第43-44页 |
| 六、VIGS沉默WRKY transcription factor 40后对木质素合成途径基因表达的影响 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 参考文献 | 第49-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 全文创新点 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
