| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明及缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第14-23页 |
| ·研究背景 | 第14-21页 |
| ·酯类水解酶简介 | 第14页 |
| ·酯类水解酶的分类 | 第14页 |
| ·酯类水解酶的催化机制 | 第14-16页 |
| ·功能宏基因组研究在筛选新型酯酶方面的应用 | 第16-17页 |
| ·生物信息学在筛选新型酯类水解酶中的应用 | 第17-18页 |
| ·酯类水解酶的应用 | 第18-19页 |
| ·同丝氨酸乙酰基转移酶家族介绍 | 第19-20页 |
| ·乙酰基转移酶的催化机制及其与酯类水解酶的区别 | 第20-21页 |
| ·立题依据和研究内容 | 第21-23页 |
| ·立题依据 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 新型酯酶基因的筛选及异源表达 | 第23-35页 |
| ·实验材料、试剂、仪器及分析软件 | 第23-26页 |
| ·实验样品来源、菌株及质粒 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第24页 |
| ·实验所需仪器及设备 | 第24-25页 |
| ·数据库及分析软件 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·大西洋沉积物宏基因文库的构建 | 第26页 |
| ·菌株E407-8和LMG 21857基因组中潜在酯类水解酶基因序列的筛选 | 第26页 |
| ·菌株E407-8和LMG21857基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·潜在酯类水解酶基因特异性引物的设计 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的扩增和测序验证 | 第28页 |
| ·重组蛋白的预表达 | 第28页 |
| ·重组蛋白E22、EstD及EstH在E.coli BL21中的异源表达及分离纯化 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第29页 |
| ·酯酶活性检测 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·基于环境基因组文库筛选得到的酯类水解酶基因 | 第29-30页 |
| ·基于细菌基因组注释及预表达结果筛选得到的酯类水解酶基因 | 第30-31页 |
| ·酯类水解酶基因E22、EstD及EstH的系统发育分析 | 第31页 |
| ·E22、EstD及EstH的异源表达、分离纯化及其酯类水解酶活性分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 酯酶E22的生化特性分析及催化机制研究 | 第35-55页 |
| ·实验试剂、仪器及分析软件 | 第35-36页 |
| ·主要试剂、试剂盒 | 第35-36页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第36页 |
| ·分析软件 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·E22蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第37页 |
| ·重组蛋白E22对pNPC4的动力学参数测定 | 第37页 |
| ·E22的最适反应温度及温度稳定性分析 | 第37页 |
| ·E22的最适pH及pH稳定性分析 | 第37-38页 |
| ·NaCl对E22酶活性及稳定性的影响 | 第38页 |
| ·金属离子对E22活性的影响 | 第38页 |
| ·抑制剂与变性剂对E22活性的影响 | 第38-39页 |
| ·有机溶剂对E22活性的影响 | 第39页 |
| ·E22突变体的构建 | 第39页 |
| ·E22及L374D/pNPC4复合物晶体初筛条件的确定 | 第39页 |
| ·E22及L374D/pNPC4复合物晶体生长条件的优化 | 第39-40页 |
| ·晶体结构解析及分子对接 | 第40页 |
| ·E22及其突变体蛋白二级结构的圆二色光谱测定 | 第40页 |
| ·结果及分析 | 第40-52页 |
| ·E22酯酶的底物特异性分析 | 第40-45页 |
| ·E22的成熟酶形式分析 | 第45-46页 |
| ·E22的整体结构分析 | 第46-48页 |
| ·E22酯酶的催化机制分析 | 第48-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 新的HTA亚家族—E22亚家族的提出 | 第55-68页 |
| ·实验菌株、试剂及分析软件 | 第55-56页 |
| ·实验菌株 | 第55页 |
| ·实验试剂 | 第55页 |
| ·分析软件 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56页 |
| ·E22同源蛋白的异源表达及分离纯化 | 第56页 |
| ·乙酰转移酶活性的检测 | 第56页 |
| ·实验结果及分析 | 第56-65页 |
| ·E22与HiHTA转移酶活性及水解酶活性的比较分析 | 第56-57页 |
| ·E22在底物识别方面区别于HTA其它两个亚家族的结构基础 | 第57-62页 |
| ·乙酰基转移酶家族蛋白的系统发育分析 | 第62-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 全文总结与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 学化论文评阅及答辩情况表 | 第79页 |
