CD81介导HCV入侵种属特异性分子基础研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-13页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第13-41页 |
| 1. 实验材料 | 第13-17页 |
| ·菌株 | 第13页 |
| ·质粒 | 第13-15页 |
| ·常用试剂和耗材 | 第15页 |
| ·常用溶液 | 第15-16页 |
| ·常用仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2. 实验方法 | 第17-41页 |
| ·基因的克隆与质粒构建 | 第17-22页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·目的基因的扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR产物检测与回收 | 第19-20页 |
| ·目的基因与载体的限制性酶切 | 第20-21页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第21-22页 |
| ·连接产物转化 | 第22页 |
| ·克隆鉴定 | 第22页 |
| ·定点突变构建突变体 | 第22-27页 |
| ·突变体及引物设计 | 第23-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·消化 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·目的蛋白表达与纯化 | 第27-30页 |
| ·蛋白表达条件筛选 | 第27-28页 |
| ·蛋白的大量表达纯化 | 第28-30页 |
| ·蛋白晶体筛选与优化 | 第30-32页 |
| ·蛋白晶体的初筛 | 第30-31页 |
| ·蛋白晶体的优化 | 第31-32页 |
| ·晶体数据收集及结构解析 | 第32-33页 |
| ·圆二色谱试验 | 第33-35页 |
| ·小角X射线散射试验 | 第35-37页 |
| ·结合试验 | 第37页 |
| ·病毒入侵试验 | 第37-41页 |
| ·构建CD81缺陷型Huh7.5.1细胞系 | 第38-39页 |
| ·扩增HCVpp和HCVcc病毒颗粒 | 第39页 |
| ·HCVpp感染试验 | 第39-40页 |
| ·HCVcc感染试验 | 第40-41页 |
| 第3章 实验结果 | 第41-60页 |
| ·目的蛋白原核表达与纯化 | 第41-43页 |
| ·晶体初筛和优化 | 第43-45页 |
| ·结晶条件初筛结果 | 第43-44页 |
| ·结晶条件优化结果 | 第44-45页 |
| ·晶体解析及结构解析 | 第45-47页 |
| ·结构分析 | 第47-51页 |
| ·圆二色谱试验 | 第51-53页 |
| ·小角散射试验 | 第53-55页 |
| ·结合试验 | 第55-57页 |
| ·病毒入侵试验 | 第57-60页 |
| ·HCVpp入侵试验 | 第57-58页 |
| ·HCVcc入侵试验 | 第58-60页 |
| 第4章 讨论 | 第60-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 个人简历及发表文章 | 第70页 |
