鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
| 摘要 | 第1-7页 |
| 文献综述 | 第7-15页 |
| 1 鸡毒支原体病原学研究 | 第7-9页 |
| 2 鸡毒支原体实验室诊断技术简介 | 第9-10页 |
| ·血清学方法 | 第9-10页 |
| ·分子生物学方法 | 第10页 |
| 3 实时荧光定量PCR技术简介 | 第10-13页 |
| ·核酸定量的发展与实时荧光定量PCR的基本原理 | 第11-12页 |
| ·荧光定量PCR法的分类 | 第12-13页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第13-15页 |
| 实验一 鸡毒支原体三种基因标准质粒构建及鉴定 | 第15-29页 |
| 1 实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌种与载体 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·溶液配制 | 第15-16页 |
| ·培养基与琼脂糖凝胶板配制 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-23页 |
| ·鸡毒支原体菌体培养 | 第17页 |
| ·引物设计与合成 | 第17-18页 |
| ·鸡毒支原体DNA模板的制备 | 第18-19页 |
| ·PCR扩增体系和条件的建立 | 第19-20页 |
| ·目的基因的克隆 | 第20-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-28页 |
| ·基因组DNA电泳检测 | 第23页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第23-25页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·菌液序列测定及相似性分析 | 第27-28页 |
| ·质粒浓度及纯度测定 | 第28页 |
| ·质粒拷贝数计算结果 | 第28页 |
| 4 小结 | 第28-29页 |
| 实验二 鸡毒支原体荧光定量PCR检测方法的建立 | 第29-39页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| ·菌种 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-31页 |
| ·鸡毒支原体DNA模板的制备 | 第29页 |
| ·SYBR GREEN荧光定量PCR反应体系 | 第29-30页 |
| ·ReaL-Time PCR反应条件 | 第30页 |
| ·鸡毒支原体定量PCR方法的建立 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-38页 |
| ·标准曲线的建立 | 第31-35页 |
| ·敏感性检测 | 第35-36页 |
| ·特异性检测 | 第36-38页 |
| 4 小结 | 第38-39页 |
| 实验三 荧光定量PCR对样品的快速检测 | 第39-44页 |
| 1 实验材料 | 第39-40页 |
| ·标准模板的制备 | 第39页 |
| ·鸡胚 | 第39页 |
| ·疫苗 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-41页 |
| ·鸡胚(尿囊液)样品模板DNA的制备 | 第40页 |
| ·疫苗样品模板DNA的制备 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 讨论 | 第44-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| Abstract | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
