| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-22页 |
| ·5'核苷酸简介 | 第10页 |
| ·几种常见5'核苷酸的性质 | 第10-12页 |
| ·5'核苷酸的生理功能及应用 | 第12-15页 |
| ·5'核苷酸作为食品添加剂 | 第12-13页 |
| ·5'核苷酸作为动物饲料添加剂 | 第13-14页 |
| ·5'核苷酸具有抗疲劳、抗氧化、促进生长发育等功效 | 第14页 |
| ·5'核苷酸具有提高免疫力的作用 | 第14-15页 |
| ·5'核苷酸及其衍生物作为重要的药物前体 | 第15页 |
| ·5'核苷酸的合成方法 | 第15-17页 |
| ·化学合成法 | 第15-16页 |
| ·生物合成法 | 第16-17页 |
| ·酶解法 | 第16页 |
| ·微生物发酵法 | 第16-17页 |
| ·酶催化法 | 第17页 |
| ·大肠杆菌酸性磷酸酶 | 第17-20页 |
| ·酸性磷酸酶AphA的空间结构 | 第18-19页 |
| ·酸性磷酸酶的催化机理 | 第19-20页 |
| ·研究意义及流程 | 第20-22页 |
| 第2章 大肠杆菌酸性磷酸酶基因的克隆重组 | 第22-32页 |
| ·材料与方法 | 第23-29页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第23-26页 |
| ·化学试剂 | 第23-24页 |
| ·生物试剂 | 第24页 |
| ·培养基配方 | 第24页 |
| ·克隆用缓冲液 | 第24-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第26页 |
| ·菌种保藏 | 第26页 |
| ·提取大肠杆菌基因组 | 第26-27页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第27页 |
| ·凝胶回收试剂盒回收凝胶 | 第27页 |
| ·高效感受态细胞制备试剂盒制备感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·碱裂解法制备质粒 | 第28页 |
| ·DNA的酶切 | 第28页 |
| ·DNA的连接 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-31页 |
| ·PCR引物设计 | 第29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·克隆载体的构建 | 第30页 |
| ·表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第3章 酸性磷酸酶的诱导表达 | 第32-41页 |
| ·材料和方法 | 第32-36页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第32-35页 |
| ·化学试剂 | 第32-33页 |
| ·缓冲液 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第33-34页 |
| ·凝胶的配制 | 第34页 |
| ·酶谱检测所用试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·重组菌诱导表达 | 第35页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·酶谱检测 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-39页 |
| ·IPTG诱导浓度对E-AphA生长状况的影响 | 第36-37页 |
| ·E-AphA诱导表达 | 第37-38页 |
| ·E-dAphA诱导表达 | 第38页 |
| ·对E-AphA和E-dAphA进行酶谱分析 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第4章 酸性磷酸酶的磷酸水解活性分析 | 第41-47页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第41-42页 |
| ·化学试剂 | 第41页 |
| ·缓冲液 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·酸性磷酸酶磷酸水解活力测定 | 第42页 |
| ·不同酶源类型对酸性磷酸酶磷酸水解活力的影响 | 第42页 |
| ·不同磷酸单酯底物磷酸水解活力测定 | 第42-43页 |
| ·反应温度对酸性磷酸酶磷酸水解活力的影响 | 第43页 |
| ·pH对酸性磷酸酶水解活力的影响 | 第43页 |
| ·金属离子对酸性磷酸酶水解活力的影响 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-46页 |
| ·不同酶源类型对酸性磷酸酶磷酸水解活力的影响 | 第43页 |
| ·不同磷酸单酯的水解酶活性测定 | 第43-44页 |
| ·反应温度对酸性磷酸酶磷酸水解活力的影响 | 第44页 |
| ·pH对酸性磷酸酶水解活力的影响 | 第44-45页 |
| ·金属离子对酸性磷酸酶水解活力的影响 | 第45-46页 |
| ·酶活性中心金属辅基的研究 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第5章 酸性磷酸酶转化核苷的研究 | 第47-52页 |
| ·材料和方法 | 第47页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第47页 |
| ·化学试剂 | 第47页 |
| ·反应缓冲液 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47页 |
| ·核苷转化反应 | 第47页 |
| ·转化率的测定 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-51页 |
| ·酶对肌苷的转化率测定 | 第47-50页 |
| ·不同酶源类型对转化率的影响 | 第47-48页 |
| ·温度对肌苷转化率的影响 | 第48页 |
| ·pH对肌苷转化率的影响 | 第48-49页 |
| ·二价阳离子对肌苷转化率的影响 | 第49-50页 |
| ·EDTA浓度对肌苷酸生成的影响 | 第50页 |
| ·酶对腺苷和鸟苷的转化率测定 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第6章 结论与展望 | 第52-54页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57页 |