| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-21页 |
| ·抗菌肽 | 第10-13页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第10-12页 |
| ·抗菌肽的结构特点及理化性质 | 第12页 |
| ·抗菌肽的生物学活性 | 第12-13页 |
| ·抗菌肽表达的研究进展 | 第13-16页 |
| ·抗菌肽的开发策略 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽的原核表达系统研究进展 | 第14-15页 |
| ·抗菌肽的真核表达系统研究进展 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽的分离纯化研究进展 | 第16-18页 |
| ·抗菌肽的分离纯化策略 | 第16-17页 |
| ·抗菌肽的分离纯化进展 | 第17-18页 |
| ·阳离子抗菌肽G13结构域 | 第18-19页 |
| ·本文的主要内容和研究意义 | 第19-21页 |
| ·本文研究的内容 | 第19页 |
| ·本文研究的意义 | 第19-21页 |
| 第二章 缩短融合头提高重组抗菌肽的实际表达量 | 第21-32页 |
| 引论 | 第21页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·菌株和载体 | 第22页 |
| ·常用溶液与试剂配制 | 第22-24页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·反向引物的设计合成 | 第25页 |
| ·高保真反向PCR | 第25页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第25-26页 |
| ·回收产物的磷酸化与连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第27页 |
| ·筛选重组子 | 第27页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第27-28页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-31页 |
| ·反向PCR结果 | 第29-30页 |
| ·诱导表达结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 阳离子抗菌肽G13的克隆,高效可溶表达,酸水解切割及纯化 | 第32-49页 |
| 引论 | 第32-33页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·菌株和载体 | 第33-34页 |
| ·常用溶液与试剂配制 | 第34页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-42页 |
| ·引物的设计合成 | 第35页 |
| ·PCR扩增G13基因序列 | 第35-36页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第36页 |
| ·DNA片段酶切连接与转化 | 第36-37页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第37页 |
| ·筛选重组子 | 第37页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第37-39页 |
| ·诱导工程菌的超声破碎 | 第39页 |
| ·Lowry法蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| ·酸水解切割融合头 | 第40页 |
| ·活性检测 | 第40-41页 |
| ·阳离子抗菌肽G13结构域的纯化 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-48页 |
| ·PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的酸水解切割 | 第44-47页 |
| ·阳离子抗菌肽G13结构域活性检测 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 阳离子抗菌肽G13结构域在酿酒酵母中表达条件的优化 | 第49-63页 |
| 引论 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·常用溶液试剂配制 | 第50-52页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·酿酒酵母工程菌的培养及诱导表达 | 第52页 |
| ·酿酒酵母工程菌表达G13结构域的活性检测 | 第52-53页 |
| ·酿酒酵母菌液PCR方法 | 第53页 |
| ·酿酒酵母工程菌的质粒抽提及测序 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-62页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE检测酿酒酵母工程菌表达的G13结构域 | 第54-55页 |
| ·酿酒酵母工程菌诱导表达活性检测 | 第55-59页 |
| ·酿酒酵母工程菌OD600值及PH值监测结果 | 第59-61页 |
| ·酿酒酵母菌液PCR检测 | 第61页 |
| ·酿酒酵母工程菌的测序结果 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 肠道菌素L50A真核表达载体的构建 | 第63-71页 |
| 引论 | 第63页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| ·菌株和载体 | 第63-64页 |
| ·主要溶液及常用试剂的配制 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-68页 |
| ·Enterocin L50A基因合成与扩增 | 第64-65页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第65页 |
| ·DNA片段酶切连接与转化 | 第65-66页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第66页 |
| ·筛选重组子 | 第66页 |
| ·重组质粒pYES2-α-L50A转化酿酒酵母INVScl | 第66-68页 |
| ·酿酒酵母工程菌的培养及诱导表达 | 第68页 |
| ·酿酒酵母工程菌表达L50A结构域的活性检测 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·酿酒酵母菌落PCR结果 | 第68-69页 |
| ·酿酒酵母工程菌诱导表达活性检测 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
