| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-20页 |
| ·β-甘露聚糖酶的简介 | 第10-12页 |
| ·β-甘露聚糖酶的作用方式及水解产物 | 第10-11页 |
| ·甘露聚糖酶的应用 | 第11-12页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因工程菌研究现状 | 第12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第12-15页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的发展 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第13-15页 |
| ·毕赤酵母中外源蛋白优化表达策略 | 第15-18页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第15-16页 |
| ·外源基因拷贝数对外源基因表达的影响 | 第16-17页 |
| ·温度对外源蛋白表达的影响 | 第17-18页 |
| ·课题意义及研究内容 | 第18-20页 |
| ·课题研究意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-36页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌种 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·常用仪器 | 第21-22页 |
| ·引物设计及合成 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·菌种保藏 | 第22-23页 |
| ·摇瓶培养 | 第23页 |
| ·Zeocin抗性初步筛选不同拷贝数重组毕赤酵母菌株 | 第23页 |
| ·含有GAPDH基因的标准质粒的构建 | 第23-26页 |
| ·GAP和MAN质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·荧光定量PCR检测β-甘露聚糖酶基因拷贝数 | 第27-28页 |
| ·分析和测定方法 | 第28-36页 |
| ·发酵液中葡萄糖含量的测定 | 第28-29页 |
| ·β-甘露聚糖酶酶活测定 | 第29-31页 |
| ·菌浓度光密度测定 | 第31页 |
| ·细胞活性分析 | 第31页 |
| ·总蛋白浓度考马斯亮蓝G250测定 | 第31-33页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第33-34页 |
| ·蛋白酶活力检测 | 第34页 |
| ·毕赤酵母mRNA表达水平检测 | 第34-36页 |
| 第三章 RT-PCR检测β-甘露聚糖酶基因拷贝数 | 第36-44页 |
| ·GAP标准质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·毕赤酵母X-33菌株总DNA的提取 | 第36页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因克隆 | 第36-38页 |
| ·GAP和MAN基因双标准曲线的建立 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR检测基因拷贝数 | 第39-42页 |
| ·Zeocin抗性初步筛选不同拷贝数菌株 | 第39-41页 |
| ·10株不同Zeocin抗性重组菌株DNA提取 | 第41页 |
| ·荧光定量PCR检测β-mannanase基因拷贝数 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 第四章 不同拷贝数对毕赤酵母表达β-mannanase的影响 | 第44-58页 |
| ·基因剂量对菌株生长特性的影响 | 第44-46页 |
| ·不同拷贝数菌株生物量的变化 | 第44-45页 |
| ·不同拷贝数菌株平均比生长速率(μ/h~(-1))的比较 | 第45-46页 |
| ·基因剂量对重组菌株底物利用能力的影响 | 第46-47页 |
| ·基因拷贝数对甘露聚糖酶表达的影响 | 第47-52页 |
| ·不同基因拷贝数对β-mannanase酶活水平的影响 | 第47-48页 |
| ·不同拷贝数重组菌株外源蛋白产量的比较 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE分析不同拷贝数重组菌株目的蛋白的表达情况 | 第50-52页 |
| ·基因剂量对β-mannanase mRNA转录水平的影响 | 第52-54页 |
| ·基因剂量对不同拷贝数重组菌株β-mannanase mRNA转录水平的影响 | 第52-53页 |
| ·不同拷贝数重组菌株β-mannanase mRNA表达时序 | 第53-54页 |
| ·基因剂量对β-mannanase分泌的影响 | 第54-55页 |
| ·不同拷贝数菌株外源基因遗传稳定性 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第五章 温度对重组菌株生理和β-mannanase表达的影响 | 第58-68页 |
| ·温度对毕赤酵母重组菌株生理特性的影响 | 第58-60页 |
| ·温度对不同拷贝数重组菌株生长的影响 | 第58-59页 |
| ·温度对毕赤酵母重组菌株活性的影响 | 第59-60页 |
| ·温度对不同基因拷贝数重组菌株β-mannanase表达的影响 | 第60-63页 |
| ·温度对不同基因剂量重组菌株β-mannanase酶活的影响 | 第60-62页 |
| ·温度对不同基因剂量重组菌株外源蛋白产量的比较 | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE分析不同温度下重组菌株目的蛋白的表达情况 | 第63-64页 |
| ·温度对重组菌株发酵液中蛋白酶活力的影响 | 第64-65页 |
| ·qPCR分析不同温度下重组菌株β-mannanase mRNA表达情况 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 第六章 结论与展望 | 第68-70页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第78页 |
