| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-13页 |
| ·石斛研究概况 | 第8页 |
| ·植物苯丙氨酸解氨酶 PAL 的研究进展 | 第8-11页 |
| ·PAL 的分布 | 第8页 |
| ·PAL 的基本特性 | 第8-9页 |
| ·PAL 的基因结构 | 第9页 |
| ·PAL 对植物生理代谢的意义 | 第9-10页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶 PAL 基因的克隆 | 第10页 |
| ·PAL 的原核表达 | 第10-11页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第11-13页 |
| ·实时荧光定量 PCR 主要工作原理 | 第11页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的应用 | 第11页 |
| ·实时荧光定量 PCR 在 PAL 中的应用 | 第11-13页 |
| 2 引言 | 第13-15页 |
| ·研究背景和意义 | 第13页 |
| ·实验内容 | 第13-14页 |
| ·技术路线 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-29页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·石斛原球茎的培养 | 第15页 |
| ·菌株与载体 | 第15页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第15-16页 |
| ·常用溶液配方及常用培养液 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-29页 |
| ·石斛原球茎 RNA 提取 | 第16-17页 |
| ·石斛原球茎 cDNA 一链的合成 | 第17页 |
| ·PAL 引物的设计 | 第17-19页 |
| ·3’-RACE 和 5’-RACE 反应 | 第19-20页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第20-21页 |
| ·载体链接及转化 | 第21页 |
| ·菌液 PCR 验证 | 第21-22页 |
| ·核苷酸序列和生物信息学分析 | 第22页 |
| ·DcPAL 基因在石斛不同组织表达的荧光定量分析 | 第22-25页 |
| ·原核表达载体构建 | 第25-27页 |
| ·DcPAL 蛋白诱导表达 | 第27-29页 |
| 4.结果与分析 | 第29-45页 |
| ·石斛 DcPAL 基因的克隆 | 第29-33页 |
| ·石斛总 RNA 样品的电泳检测 | 第29页 |
| ·石斛保守片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·利用 RACE 法克隆 DcPAL 基因 5’端 3’端 cDNA 序列 | 第30-32页 |
| ·石斛 DcPAL 基因 ORF 框的获得 | 第32-33页 |
| ·石斛 PAL 基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第33-39页 |
| ·石斛 DcPAL 基因 cDNA 序列特征 | 第33页 |
| ·DcPAL 基因 Blastx 分析 | 第33-34页 |
| ·DcPAL 基因编码蛋白的同源分析 | 第34-36页 |
| ·疏水性分析 | 第36-37页 |
| ·石斛 PAL 蛋白的进化树分析 | 第37-38页 |
| ·石斛 PAL 氨基酸序列同源建模 | 第38-39页 |
| ·DcPAL 在组织中表达的荧光定量分析 | 第39-43页 |
| ·总 RNA 提取 | 第39页 |
| ·引物扩增特异性检测 | 第39-40页 |
| ·Action 基因引物的专一性分析 | 第40-41页 |
| ·DcPAL 基因引物的专一性分析 | 第41-42页 |
| ·DcPAL 基因相对表达量分析 | 第42-43页 |
| ·DcPAL 的原核表达 | 第43-45页 |
| ·原核表达载体构建 | 第43页 |
| ·重组质粒 pETDuet-1/PAL 在 BL21（DE3）中的诱导表达及检测 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
| 在读期间发表的论文 | 第53页 |
