| 目录 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-44页 |
| ·miRNA（microRNA）的发现及特征 | 第17-21页 |
| ·miRNA 的发现 | 第17-18页 |
| ·miRNA 的特征 | 第18-19页 |
| ·miRNA 与其它小分子 RNA 的区别和联系 | 第19-21页 |
| ·miRNA 的生物合成及加工 | 第21-24页 |
| ·miRNA 的重要合成加工蛋白 | 第21-22页 |
| ·miRNA 的合成过程 | 第22-24页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第24-26页 |
| ·靶基因 mRNA 的剪切降解 | 第24页 |
| ·靶基因翻译水平的抑制 | 第24-25页 |
| ·靶基因表观遗传学水平的调控 | 第25-26页 |
| ·miRNA 对基因表达调控的作用 | 第26-31页 |
| ·miRNA 对植物生长发育的调控 | 第26-27页 |
| ·miRNA 对植物响应逆境胁迫的调控 | 第27-31页 |
| ·miRNA 的自身调节机制 | 第31-34页 |
| ·miRNA 加工复合体的调节 | 第31-32页 |
| ·miRNA 自身反馈调节 | 第32-33页 |
| ·miRNA 的模拟靶基因竞争调节 | 第33-34页 |
| ·植物可变剪切的发现和特点 | 第34-35页 |
| ·可变剪切的发现 | 第34页 |
| ·可变剪切的特点 | 第34-35页 |
| ·动植物 mRNA 剪切的序列特征 | 第35-36页 |
| ·mRNA 剪切位点识别 | 第36-37页 |
| ·可变剪切的种类 | 第37-38页 |
| ·可变剪切过程中参与的重要蛋白 | 第38-39页 |
| ·逆境胁迫影响可变剪切 | 第39-40页 |
| ·miRNA 的可变剪切 | 第40-42页 |
| ·本研究的目的及其意义 | 第42-44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-60页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·菌株与质粒 | 第44页 |
| ·酶与生化试剂 | 第44页 |
| ·实验所用引物与寡核苷酸 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-60页 |
| ·拟南芥基因组提取 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第46页 |
| ·小量碱法提取大肠杆菌中的质粒 | 第46-47页 |
| ·农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备及转化 | 第47-48页 |
| ·农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·农杆菌 GV3101 感受态细胞的转化 | 第47-48页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第48页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第48页 |
| ·转基因植物的 GUS 组织化学染色分析 | 第48-49页 |
| ·GUS 活性测定 | 第49-50页 |
| ·RNA 提取 | 第50页 |
| ·RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第50页 |
| ·反转录合成一链 cDNA | 第50-51页 |
| ·Real-Time PCR 体系及反应条件 | 第51页 |
| ·农杆菌介导的本生烟瞬时侵染 | 第51-52页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第52-54页 |
| ·RNA 电泳 | 第52页 |
| ·转膜 | 第52-53页 |
| ·杂交 | 第53-54页 |
| ·Small RNA 的提取 | 第54-56页 |
| ·Small RNA 实验准备 | 第54-55页 |
| ·Small RNA 分离步骤 | 第55-56页 |
| ·Small RNA 的 Northern 杂交分析 | 第56-58页 |
| ·聚丙烯酰胺尿素变性凝胶与样品的制备 | 第56-57页 |
| ·Small RNA 电泳检测 | 第57页 |
| ·Small RNA 转膜 | 第57页 |
| ·P32-ATP 标记的寡聚核苷酸探针合成 | 第57页 |
| ·用寡核苷酸探针检测小 RNA | 第57-58页 |
| ·Small RNA 的 qRT-PCR 分析 | 第58-60页 |
| ·miRNA 第一链合成 | 第58-59页 |
| ·Mature miRNA 荧光定量检测 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-95页 |
| ·拟南芥中胁迫相关 miRNA 的筛选鉴定 | 第60-64页 |
| ·利用拟南芥 miRNA 芯片鉴定胁迫相关的 miRNA | 第60-61页 |
| ·miR400 序列分析 | 第61-62页 |
| ·miR400 与宿主基因共转录 | 第62-64页 |
| ·拟南芥 miR400 表达模式分析 | 第64-66页 |
| ·启动子活性检测载体构建 | 第64页 |
| ·转基因拟南芥 GUS 染色及活性分析 | 第64-66页 |
| ·拟南芥 miR400 对低温胁迫的响应 | 第66-69页 |
| ·低温胁迫诱导 miR400 及宿主基因表达 | 第66-68页 |
| ·低温胁迫在转录水平上调控 miR400 及宿主基因表达 | 第68-69页 |
| ·拟南芥 miR400 对高温胁迫的响应 | 第69-72页 |
| ·高温胁迫诱导 miR400 原初转录物的表达 | 第69-71页 |
| ·高温胁迫抑制 miR400 成熟体的表达 | 第71-72页 |
| ·高温胁迫诱导 miR400 可变剪切的发生 | 第72-75页 |
| ·高温胁迫诱导 miR400 可变剪切的分析 | 第72-73页 |
| ·可变剪切的发生造成 miR400 前体转录物的积累 | 第73-75页 |
| ·高温胁迫触发的可变剪切影响 miR400 成熟体的表达 | 第75-78页 |
| ·可变剪切载体的构建 | 第75-77页 |
| ·可变剪切对 miR400 成熟体的影响 | 第77-78页 |
| ·剪切信号对 miR400 可变剪切的影响 | 第78-81页 |
| ·高温胁迫下 miR400 剪切信号的变化 | 第78-80页 |
| ·可变剪切信号对 miR400 加工的影响 | 第80-81页 |
| ·可变剪切重要蛋白 SR 对 miR400 加工过程的影响 | 第81-83页 |
| ·拟南芥 miR400 的功能研究 | 第83-86页 |
| ·miR400 超表达载体构建与 miR400 突变体纯合体筛选 | 第83-84页 |
| ·miR400 参与植物抵御高温胁迫的功能分析 | 第84-86页 |
| ·拟南芥 miR400 靶基因的筛选和初步鉴定 | 第86-88页 |
| ·miR400 靶基因筛选 | 第86-87页 |
| ·miR400 靶基因鉴定 | 第87-88页 |
| ·可变剪切调控 miRNA 机制的普遍性 | 第88-89页 |
| ·拟南芥内含子 miRNA 分析 | 第89-91页 |
| ·拟南芥受可变剪切调控 miRNA 筛选 | 第91-92页 |
| ·玉米气生根发育相关 miRNA 的分离与鉴定 | 第92-95页 |
| 4 讨论 | 第95-99页 |
| 5 结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第111页 |
