| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 縮略语表 | 第11-12页 |
| 1. 文献综述 | 第12-22页 |
| ·猪圆环病毒概述 | 第12页 |
| ·猪圆环病毒的理化特性 | 第12-13页 |
| ·猪圆环病毒的基因组特点 | 第13页 |
| ·猪圆环病毒基因组的转录 | 第13-14页 |
| ·猪圆环病毒的主要功能蛋白 | 第14-16页 |
| ·Rep蛋白 | 第14-15页 |
| ·Cap蛋白 | 第15-16页 |
| ·其他蛋白 | 第16页 |
| ·猪圆环病毒的复制机理研究进展 | 第16-20页 |
| ·病毒与宿主的相互作用 | 第20-22页 |
| 2. 目的意义 | 第22-23页 |
| 3. 材料与方法 | 第23-36页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·抗生素类 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·其它溶液 | 第25页 |
| ·引物 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第27页 |
| ·目的DNA片段的纯化回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的少量提取与酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒的少量提取 | 第29-30页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·质粒的大量制备 | 第30-31页 |
| ·细胞的复苏、传代、冻存 | 第31-32页 |
| ·细胞的复苏 | 第31-32页 |
| ·细胞的传代 | 第32页 |
| ·细胞的冻存 | 第32页 |
| ·细胞转染 | 第32页 |
| ·EGFP蛋白的定量检测 | 第32-33页 |
| ·海肾荧光素酶活性检测 | 第33页 |
| ·细胞总DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR | 第34-36页 |
| 4. 结果与分析 | 第36-55页 |
| ·基于EGFP报告基因的PCV2复制子的构建及验证 | 第36-42页 |
| ·复制子质粒的构建 | 第36-39页 |
| ·PCV2 ORF1基因的扩增 | 第37页 |
| ·pIRES2-ORF1-EGFP质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·复制子pT-Ori-ORF1-IRES-EGFP和非复制子pT-ORF1-IRES-EGFP的构建 | 第38-39页 |
| ·复制子活性的初步检测 | 第39-42页 |
| ·荧光强度与转染EGFP细胞蛋白的相关性分析 | 第39-41页 |
| ·转染复制子与非复制子后荧光强度的比较 | 第41-42页 |
| ·基于Rluc报告基因的PCV2复制子的构建及验证 | 第42-48页 |
| ·质粒的构建 | 第44-47页 |
| ·PCV2 ORF1的克隆 | 第44页 |
| ·Rluc基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·质粒pc-Rluc的构建 | 第45页 |
| ·质粒pc-Rluc-2A-ORF1的构建 | 第45-46页 |
| ·复制子pT-Ori-Rluc-2A-ORF1和非复制子pT-Rluc-2A-ORF1的构建 | 第46-47页 |
| ·复制子活性的初步检测 | 第47-48页 |
| ·PCV2复制子的优化 | 第48-51页 |
| ·PCV2复制起始区Ori的扩增 | 第49页 |
| ·复制子质粒pc-Ori-Rluc-2A-ORF1和pc-Rluc-2A-ORF1-Ori的构建 | 第49-51页 |
| ·复制子质粒pc-Ori-Rluc-2A-ORF1的构建 | 第49-50页 |
| ·复制子质粒pc-Rluc-2A-ORF1-Ori的构建 | 第50-51页 |
| ·PCV2复制子活性检测条件的优化 | 第51-53页 |
| ·最佳检测时间的确定 | 第51-52页 |
| ·最佳转染剂量的确定 | 第52-53页 |
| ·利巴韦林对PCV2复制子活性的影响 | 第53-55页 |
| ·利巴韦林对复制子蛋白表达的影响 | 第53页 |
| ·利巴韦林对复制子拷贝数的影响 | 第53-55页 |
| 5. 讨论与结论 | 第55-59页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| ·复制子系统 | 第55页 |
| ·报告基因 | 第55-56页 |
| ·PCV2复制子的构建及优化 | 第56-57页 |
| ·复制子活性检测条件的优化 | 第57页 |
| ·利巴韦林对PCV2复制子活性的影响 | 第57-58页 |
| ·利巴韦林对复制子蛋白表达的影响 | 第58页 |
| ·利巴韦林对复制子拷贝数的影响 | 第58页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
