| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 缩略词表 | 第12-16页 |
| 序言 | 第16-26页 |
| 1 胚胎着床的分子机制 | 第16-18页 |
| ·子宫上皮细胞表面黏附分子的作用 | 第16-17页 |
| ·酶与细胞因子的作用 | 第17-18页 |
| 2 影响胚胎着床的因素 | 第18-20页 |
| ·胚胎发育缺陷 | 第18页 |
| ·母源性物质对体外受精胚胎发育的影响 | 第18-20页 |
| 3 胚胎的半抗原性与子宫内膜容受性 | 第20-23页 |
| ·主要组织相容性抗原在胚胎植入子宫内膜过程中的作用 | 第20-22页 |
| ·细胞因子对胚胎发育的影响 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-26页 |
| 第一章 发育胚胎差异表达基因IK的筛选 | 第26-41页 |
| 摘要 | 第26-27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·相关试剂及菌种 | 第27-28页 |
| ·卵母细胞的体外成熟 | 第28页 |
| ·体外成熟卵母细胞的体外受精与培养 | 第28-29页 |
| ·总RNA的提取与反转录 | 第29页 |
| ·差异显示PCR | 第29-30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳及差异DNA条带回收 | 第30页 |
| ·二次PCR产物的回收 | 第30-31页 |
| ·测序和数据库比对分析 | 第31页 |
| ·实时定量PCR | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-35页 |
| ·体外发育胚胎收集 | 第32-33页 |
| ·差异转录基因的筛选 | 第33-34页 |
| ·差异条带序列分析 | 第34页 |
| ·差异转录基因在不同发育阶段中mRNA含量的定量检测 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| ·差异基因在8细胞期和囊胚期胚胎中的含量 | 第35-37页 |
| ·差异基因在体外成熟MⅡ卵母细胞与GV期卵母细胞中的mRNA表达量变化 | 第37-38页 |
| 小结 | 第38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第二章 IK对牛植入前胚胎发育的影响 | 第41-56页 |
| 摘要 | 第41-43页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| ·不同发育时期牛植入前胚胎的收集 | 第43页 |
| ·胚胎免疫荧光染色 | 第43页 |
| ·受精卵胞质Stealth RNAi~(TM) siRNA显微注射 | 第43-44页 |
| ·qPCR检测基因表达 | 第44页 |
| ·统计学分析 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-52页 |
| ·不同发育时期牛植入前胚胎的收集 | 第44页 |
| ·IK在牛植入前胚胎中的蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·IK stealth RNAi~(TM) siRNA干扰效率检测 | 第45-46页 |
| ·注射stealth RNAi~(TM) siRNA干扰IK对胚胎发育率的影响 | 第46-47页 |
| ·stealth RNAi~(TM) siRNA干扰IK表达对相关基因表达的影响 | 第47-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 第三章 IK对体外培养牛胎儿成纤维细胞的影响 | 第56-78页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-62页 |
| ·相关试剂及菌种 | 第57页 |
| ·IK过表达载体构建 | 第57-59页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的分离与培养 | 第59页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞传代培养、冻存与复苏解冻培养 | 第59-60页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418及杀稻瘟菌素耐受性的检测 | 第60-61页 |
| ·脂质体Lipofectamine 2000转染牛胎儿成纤维细胞 | 第61页 |
| ·单克隆细胞的筛选 | 第61-62页 |
| ·统计学分析 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-74页 |
| ·IK过表达载体的构建 | 第62-65页 |
| ·IK miRNA干扰载体设计 | 第65-68页 |
| ·组织块贴附法分离培养牛胎儿成纤维细胞 | 第68页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418和杀稻瘟菌素的耐受性检测 | 第68-69页 |
| ·脂质体转染牛胎儿成纤维细胞瞬时表达效果检测 | 第69-72页 |
| ·转基因单克隆细胞的筛选与检测 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞原代与传代培养 | 第74-75页 |
| ·体细胞外源基因转染方法 | 第75页 |
| ·载体瞬时转染效率的鉴定 | 第75-76页 |
| ·IK对牛胎儿成纤维细胞的生长及相关基因的影响 | 第76页 |
| 小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 总结 | 第78-79页 |
| 发表论文目录 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
