| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 TSA处理成纤维细胞对其生长、形态及组蛋白乙酰化水平的影响 | 第14-25页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 实验材料 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·仪器 | 第15页 |
| 2 实验方法 | 第15-17页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第15-16页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的传代培养及冷冻复苏 | 第16页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第16-17页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第17页 |
| 3 实验结果 | 第17-22页 |
| ·TSA对牛胎儿成纤维细胞生长的影响 | 第18页 |
| ·TSA对牛胎儿成纤维细胞形态的影响 | 第18页 |
| ·TSA对牛胎儿成纤维细胞组蛋白乙酰化水平的影响 | 第18-22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-25页 |
| 第二章 TSA处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因表达及在其启动子区甲基化的影响 | 第25-43页 |
| 引言 | 第25-26页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·细菌和质粒 | 第26页 |
| ·分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·仪器 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| ·收集细胞及细胞总RNA提取 | 第27页 |
| ·反转录合成cDNA | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR检测牛胎儿成纤维细胞多能基因及甲基化相关基因的表达量水平变化 | 第28页 |
| ·RT-PCR检测牛胎儿成纤维细胞TET1、TET2、TET3基因的表达量水平变化 | 第28-29页 |
| ·TSA处理牛胎儿成纤维细胞后基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·TSA处理牛胎儿成纤维细胞后基因组DNA的甲基化处理 | 第30-31页 |
| ·重亚硫酸盐PCR测序法检测多能基因启动子区CpG位点甲基化状态 | 第31页 |
| ·启动子目的条带的胶回收、连接及转化 | 第31页 |
| ·BSP-DNA阳性细菌克隆测序 | 第31-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-40页 |
| ·TSA处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因表达的影响 | 第34-37页 |
| ·TSA处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因启动子区甲基化水平的影响 | 第37-39页 |
| ·荧光定量PCR及RT-PCR检测牛胎儿成纤维细胞甲基化相关基因的表达量变化 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第三章 5-Aza-dC单独及与TSA联合处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因及表观修饰相关基因表达的影响 | 第43-53页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·分子生物学试剂 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45页 |
| ·5-Aza-dC处理牛胎儿成纤维细胞的生长曲线的测定 | 第45页 |
| ·收集细胞及细胞总RNA提取 | 第45页 |
| ·反转录合成cDNA | 第45页 |
| ·荧光定量PCR检测牛胎儿成纤维细胞多能基因的表达量水平变化 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-50页 |
| ·5-Aza-dC对牛胎儿成纤维细胞的生长的影响 | 第45-46页 |
| ·5-Aza-dC处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因表达的影响 | 第46-47页 |
| ·5-Aza-dC与TSA联合处理牛胎儿成纤维细胞对多能基因表达的影响 | 第47-49页 |
| ·5-Aza-dC处理牛胎儿成纤维细胞对表观修饰相关基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第四章 文献综述 | 第53-70页 |
| 1 表观遗传修饰研究进展 | 第53-55页 |
| ·DNA甲基化与去甲基化 | 第54-55页 |
| ·组蛋白乙酰化与去乙酰化 | 第55页 |
| 2 体细胞核移植与克隆胚胎异常现象及影响因素 | 第55-57页 |
| ·克隆胚胎异常现象 | 第55-56页 |
| ·影响体细胞克隆效率的因素 | 第56-57页 |
| 3 细胞重编程领域的研究进展 | 第57-59页 |
| ·细胞重编程主要发展历程 | 第57-58页 |
| ·细胞重编程影响因素与重编程相关的基因及分子机制 | 第58-59页 |
| 4 表观遗传修饰与体细胞核移植重编程的关系 | 第59-61页 |
| ·DNA甲基化与体细胞核移植重编程的关系 | 第60页 |
| ·组蛋白乙酰化与体细胞核移植重编程的关系 | 第60-61页 |
| 5 对供体细胞核重构胚表观遗传修饰的改进 | 第61-64页 |
| ·HDACs抑制剂对供核细胞表观修饰的改进 | 第62-63页 |
| ·DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-dC对供核细胞表观修饰改进 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第71页 |
