| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-16页 |
| ·阿尔茨海默病及其免疫治疗机制简述 | 第12页 |
| ·阿尔茨海默病主动免疫治疗现状 | 第12-13页 |
| ·本研究AD疫苗研究策略及主要研究内容 | 第13-16页 |
| 2 破伤风毒素片段作载体分子介导的阿尔茨海默病重组Aβ1-15嵌合疫苗研究 | 第16-42页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·菌株、质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·引物的设计 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17-18页 |
| ·抗体、蛋白、多肽 | 第18页 |
| ·动物 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第18-20页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第20-21页 |
| ·Western Blot免疫印迹试验 | 第21页 |
| ·蛋白质的定量分析 | 第21页 |
| ·动物免疫实验 | 第21-22页 |
| ·血清抗体测定 | 第22页 |
| ·细胞免疫水平检测 | 第22-23页 |
| ·斑点杂交实验(Dot-blot) | 第23页 |
| ·APP转基因AD模型动物免疫实验 | 第23-24页 |
| ·血清抗体测定(转基因小鼠部分) | 第24页 |
| ·小鼠行为学实验 | 第24页 |
| ·免疫组化检测小鼠大脑组织Aβ斑块 | 第24-25页 |
| ·统计学分析 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-36页 |
| ·3种原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达,纯化及鉴定 | 第26-28页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体水平 | 第28-30页 |
| ·T细胞免疫应答反应 | 第30-31页 |
| ·斑点杂交实验结果 | 第31-32页 |
| ·ELISA法测定各免疫阶段抗Aβ的抗体水平(转基因小鼠部分) | 第32-33页 |
| ·免疫后小鼠血清抗体滴度以及抗体亚型分析(转基因小鼠部分) | 第33-34页 |
| ·免疫后小鼠行为学实验 | 第34-35页 |
| ·免疫组化检测小鼠脑组织(海马区和皮质区)Aβ斑块含量 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·重组蛋白具有良好的免疫原性,免疫反应偏向于Th2型 | 第36-37页 |
| ·产生的Aβ特异性抗体更倾向与Aβ寡聚体结合 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白的二价疫苗潜力 | 第39页 |
| ·使用AD模型小鼠评价重组蛋白的免疫预防效果 | 第39页 |
| ·本章小结 | 第39-42页 |
| 3 破伤风毒素片段作载体分子介导的阿尔茨海默病Aβ1-15表位核酸疫苗研究 | 第42-60页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·菌株、质粒 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·引物的设计 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·抗体 | 第43页 |
| ·动物 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·质粒的大量提取 | 第44-45页 |
| ·质粒的转染 | 第45页 |
| ·间接免疫荧光鉴定蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·动物免疫实验 | 第46页 |
| ·血清抗体测定 | 第46页 |
| ·细胞免疫水平检测 | 第46页 |
| ·斑点杂交实验 | 第46-47页 |
| ·AD转基因动物免疫实验 | 第47页 |
| ·血清抗体测定(转基因小鼠部分) | 第47页 |
| ·细胞免疫水平检测(转基因小鼠部分) | 第47页 |
| ·小鼠大脑组织的免疫组化 | 第47-48页 |
| ·统计学分析 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-56页 |
| ·2种真核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·真核表达载体在BHK21细胞中的表达及鉴定 | 第48-49页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体水平 | 第49-52页 |
| ·T细胞免疫应答反应 | 第52-53页 |
| ·斑点杂交实验 | 第53页 |
| ·ELISA法测定各免疫阶段抗Aβ的抗体水平(转基因小鼠部分) | 第53-54页 |
| ·免疫后小鼠血清抗体滴度以及抗体亚型分析(转基因小鼠部分) | 第54-55页 |
| ·T细胞免疫应答反应(转基因小鼠部分) | 第55页 |
| ·免疫组化检测小鼠脑组织Aβ斑块 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·重组Aβ表位DNA疫苗具有良好的免疫原性 | 第56-57页 |
| ·DNA疫苗同重组亚单位疫苗之间的比较 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-60页 |
| 4 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-82页 |
| 附A. 英文缩略词表 | 第66-67页 |
| 附B. 综述 | 第67-82页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84页 |
