| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一部分 宫颈癌临床组织中 miR-145 的表达 | 第16-22页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-18页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第17页 |
| ·cDNA 的合成 | 第17-18页 |
| ·Real-time PCR 扩增检测目的片段 | 第18页 |
| ·统计学数据分析 | 第18页 |
| ·结果 | 第18-19页 |
| ·讨论 | 第19页 |
| 参考文献 | 第19-22页 |
| 第二部分 miR-145 在宫颈癌细胞中下调机制的研究 | 第22-46页 |
| ·前言 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·细胞系 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·质粒及表达载体 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·其他常用常规试剂参考《分子克隆实验指南》配制 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·免疫印迹(Western blot) | 第24页 |
| ·E6shRNA 表达质粒的构建 | 第24-27页 |
| ·稳定表达E6shRNA 的HeLa 细胞株的建立 | 第27页 |
| ·真核细胞转染方法 | 第27页 |
| ·mp53-flag 表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·cDNA 的合成 | 第28页 |
| ·E6-flag 表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第29页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖曲线 | 第29页 |
| ·免疫组化 | 第29-30页 |
| ·BCA 蛋白定量 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-43页 |
| ·糖皮质激素刺激可以下调HeLa 细胞中p53 和miR-145 的表达 | 第30-31页 |
| ·过表达外源性的p53 可以引起miR-145 及其下游靶基因IRS-1 的表达变化 | 第31-32页 |
| ·miR-145 可在翻译水平抑制其靶基因IRS-1 的表达 | 第32页 |
| ·miR-145 的模拟物和抑制物可以调控IRS-1 的表达 | 第32-33页 |
| ·免疫组化检测宫颈癌组织中IRS-1 的表达 | 第33-34页 |
| ·宫颈癌细胞中突变型p53 不能调控miR-145 的表达 | 第34-35页 |
| ·化疗药物诱导内源性p53 的聚集 | 第35-36页 |
| ·mp53 表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·过表达mp53 不能诱导miR-145 的上调及其靶基因IRS-1 的下调 | 第37页 |
| ·宫颈癌细胞表达糖皮质激素受体 | 第37-38页 |
| ·糖皮质激素刺激可以增强E6 蛋白的表达 | 第38页 |
| ·E6-flag 表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·过表达E6 可以使p53 降解 | 第39页 |
| ·过表达E6 可抑制由化疗药物所诱导的p53 聚集及miR-145 表达上调 | 第39-40页 |
| ·E65hRNA 表达质粒的构建及其HeLa 稳定株的建立 | 第40页 |
| ·敲低E6 可增强H202 和化疗药物诱导的p53 聚集及miR-145 上调 | 第40-41页 |
| ·敲低E6 可以增强细胞对化疗药物的敏感性 | 第41页 |
| ·糖皮质激素可削弱化疗药物诱导的细胞增殖抑制效应 | 第41-42页 |
| ·糖皮质激素可抑制化疗药物诱导的p53 及miR-145 表达上调 | 第42-43页 |
| ·过表达miR-145 可部分逆转由糖皮质激素诱导的耐药表型形成 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第三部分 MIR-145 在宫颈癌细胞中生物学功能的研究 | 第46-54页 |
| ·前言 | 第46-47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·细胞系 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·方法 | 第47页 |
| ·细胞周期分析 | 第47页 |
| ·其他实验方法 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·稳定表达miR-145 的HeLa 细胞株有效性的检验 | 第47-48页 |
| ·在HeLa 细胞中过表达miR-145 可增强其对化疗药物的敏感性 | 第48-49页 |
| ·宫颈癌细胞过表达miR-145 可增强化疗药物诱导的周期阻滞 | 第49页 |
| ·在宫颈癌细胞中miR-145 可协同放大p53 的效应功能 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 文献综述 | 第56-68页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第70-71页 |
