| 目录 | 第1-9页 |
| 致谢 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 1. 绪论 | 第18-33页 |
| ·水稻条纹病毒研究进展 | 第18-27页 |
| ·水稻条纹病毒的危害及其重要性 | 第18-19页 |
| ·RSV的形态及基因组结构 | 第19-21页 |
| ·RSV编码的蛋白及功能研究进展 | 第21-26页 |
| ·RdRP | 第21-22页 |
| ·NS2 | 第22页 |
| ·NSvc2 | 第22页 |
| ·NS3 | 第22-23页 |
| ·CP | 第23页 |
| ·SP | 第23-26页 |
| ·SP基因复制与表达策略 | 第23-24页 |
| ·SP的血清学特性 | 第24页 |
| ·SP同源性分析 | 第24页 |
| ·SP在寄主植物内的积累 | 第24-26页 |
| ·SP在介体昆虫内的积累 | 第26页 |
| ·NSvc4 | 第26页 |
| ·RSV的进化地位 | 第26-27页 |
| ·植物RNA病毒与寄主叶绿体互作的生物学意义 | 第27-29页 |
| ·复制组装 | 第27-28页 |
| ·致病性和防卫反应 | 第28-29页 |
| ·植物PsbP蛋白的研究进展 | 第29-33页 |
| ·PsbP的进化演变 | 第29-30页 |
| ·PsbP的功能 | 第30-31页 |
| ·PsbP的结构 | 第31-33页 |
| ·PsbP的结构域 | 第31页 |
| ·PsbP的功能域 | 第31-33页 |
| 2 水稻条纹病毒编码的SP蛋白的功能分析 | 第33-51页 |
| ·材料与方法 | 第33-42页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·SP的PVX表达载体构建 | 第34-36页 |
| ·侵染性克隆和病毒的接种 | 第36-37页 |
| ·侵染性克隆的接种 | 第36页 |
| ·本氏烟摩擦接种RSV | 第36-37页 |
| ·水稻喂虫传毒 | 第37页 |
| ·病毒侵染效率的统计分析 | 第37页 |
| ·ELISA检测病毒含量 | 第37页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·Northern印迹分析 | 第38-39页 |
| ·甲醛变性凝胶电泳 | 第38页 |
| ·RNA转膜 | 第38-39页 |
| ·杂交 | 第39页 |
| ·烟草和水稻的遗传转化 | 第39-40页 |
| ·遗传转化载体的构建 | 第39页 |
| ·农杆菌的构建和培养 | 第39-40页 |
| ·烟草和水稻的转化和生根 | 第40页 |
| ·植物可溶性蛋白的提取 | 第40页 |
| ·Western印迹分析 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE | 第40页 |
| ·电转移 | 第40页 |
| ·Western印迹分析 | 第40-41页 |
| ·GFP融合蛋白的瞬时表达 | 第41页 |
| ·低温包埋及免疫金标记 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-49页 |
| ·PVX异源病毒载体表达SP能够加重症状 | 第42-44页 |
| ·在本氏烟和水稻中转入SP基因不能引起症状 | 第44-46页 |
| ·转基因植物中SP蛋白的表达提高了RSV的侵染效率 | 第46-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 3 RSV SP蛋白的寄主互作因子筛选 | 第51-64页 |
| ·材料与方法 | 第51-56页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·酵母双杂交筛库试验 | 第51-54页 |
| ·用于酵母双杂交筛库的诱饵构建 | 第51-52页 |
| ·质粒转化酵母菌株Gold(LiAc法) | 第52-53页 |
| ·SP蛋白对酵母毒性及其自激活活性的检测 | 第53页 |
| ·用融合法进行酵母双杂交筛库 | 第53页 |
| ·酵母双杂交重组质粒的构建 | 第53页 |
| ·酵母双杂交验证两种已知蛋白的互作 | 第53-54页 |
| ·双分子荧光互补试验(BIFC) | 第54页 |
| ·载体构建 | 第54页 |
| ·农杆菌浸润以及激光共聚焦观察BiFC结果 | 第54页 |
| ·GST pull-down试验 | 第54-56页 |
| ·蛋白表达载体构建 | 第54页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·表达产物的纯化 | 第55页 |
| ·目的蛋白之间的GST pull-down | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·SP蛋白对酵母毒性及其自激活活性的检测 | 第56页 |
| ·水稻中与SP互作的寄主因子筛选 | 第56-57页 |
| ·酵母双杂交验证PsbP与SP蛋白的互作 | 第57-59页 |
| ·BiFC验证PsbP与SP蛋白的互作 | 第59-61页 |
| ·GST pull-down验证PsbP与SP蛋白的互作 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 4 SP蛋白与PsbP互作机理的研究 | 第64-86页 |
| ·材料与方法 | 第64-69页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·本氏烟和水稻的遗传转化 | 第64-66页 |
| ·Real-time RT-PCR分析 | 第66-67页 |
| ·测定植物光合作用参数 | 第67页 |
| ·常温包埋样品制备以及电镜观察细胞结构 | 第67-68页 |
| ·共聚焦显微镜观察PsbP蛋白的亚细胞定位 | 第68页 |
| ·低温包埋样品处理及免疫金标记 | 第68页 |
| ·基于DNA1和BMV载体的基因沉默 | 第68-69页 |
| ·沉默载体的构建 | 第68页 |
| ·沉默载体的接种 | 第68-69页 |
| ·RSV病毒的接种和侵染效率的统计 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-83页 |
| ·下调表达PsbP基因的植株生长迟缓 | 第69-72页 |
| ·SP与PsbP的互作影响植株的光合作用 | 第72-73页 |
| ·SP与PsbP的互作破坏细胞叶绿体结构 | 第73-75页 |
| ·SP能够改变PsbP的亚细胞定位 | 第75-76页 |
| ·SP能够减少PsbP在叶绿体中的积累量 | 第76-78页 |
| ·PsbP蛋白的表达量对RSV侵染的影响 | 第78-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| 5 全文小结 | 第86-87页 |
| 附录Ⅰ BBW V-2 RNA2编码的抑制子鉴定及作用机理的研究 | 第87-123页 |
| ·文献综述 | 第87-96页 |
| ·RNA沉默概述 | 第87-88页 |
| ·RNA沉默是抵御病毒入侵的固有机制 | 第88-90页 |
| ·病毒编码的沉默抑制子 | 第90-91页 |
| ·沉默抑制子的分子机理 | 第91-94页 |
| ·抑制病毒的识别和siRNA的产生 | 第91-92页 |
| ·阻止RISC的组装 | 第92-93页 |
| ·抑制沉默信号的传导 | 第93-94页 |
| ·沉默抑制子与症状诱导的关系 | 第94-96页 |
| ·立项依据 | 第96-97页 |
| ·材料与方法 | 第97-102页 |
| ·材料 | 第97-98页 |
| ·农杆菌瞬时表达沉默诱导体系的建立 | 第98-99页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第98-99页 |
| ·瞬时表达载体在本氏烟上的表达 | 第99页 |
| ·GFP荧光观察 | 第99页 |
| ·小RNA的分离和杂交 | 第99-100页 |
| ·小RNA的分离 | 第99-100页 |
| ·小RNA的尿素变性电泳 | 第100页 |
| ·小RNA的转膜 | 第100页 |
| ·小RNA的预杂交和杂交 | 第100页 |
| ·系统沉默体系的建立 | 第100-101页 |
| ·沉默信号传导试验 | 第101页 |
| ·沉默回复试验 | 第101页 |
| ·致病性分析试验 | 第101页 |
| ·凝胶阻滞试验 | 第101-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-120页 |
| ·VP53、VP37、LCP能抑制由ssGFP诱发的局部沉默 | 第102-106页 |
| ·BBWV-2编码的各蛋白不能抑制由dsGFP诱发的局部沉默 | 第106-107页 |
| ·VP53、VP37、LCP可以抑制系统沉默 | 第107-110页 |
| ·VP53、VP37、LCP蛋白可以抑制GFP沉默信号的传导 | 第110-113页 |
| ·VP37和LCP能回复已建立的转录后基因沉默 | 第113-115页 |
| ·VP53、VP37和LCP蛋白具有不同的GFP RNA结合活性 | 第115-117页 |
| ·VP53、VP37和LCP蛋白的表达能加重PVX的症状 | 第117-120页 |
| ·讨论 | 第120-123页 |
| 附录Ⅱ 参考文献 | 第123-138页 |
| 附录Ⅲ 本论文所用术语缩写词及中英文对照 | 第138-141页 |
| 附录Ⅳ 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第141-143页 |
| 附录Ⅴ 常用缓冲液和培养基配方 | 第143-151页 |
