| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 引言 | 第16-26页 |
| ·研究背景 | 第16-17页 |
| ·恶性肿瘤 | 第16页 |
| ·治疗手段 | 第16-17页 |
| ·新城疫病毒 | 第17-20页 |
| ·NDV 的危害和防治 | 第17页 |
| ·NDV 的粒子框架和基因组 | 第17-18页 |
| ·NDV 的编码蛋白 | 第18页 |
| ·NDV 的抵抗力和培养 | 第18-19页 |
| ·NDV 的分类 | 第19-20页 |
| ·NDV 的抗肿瘤作用 | 第20-22页 |
| ·NDV 的感染和复制机理 | 第20页 |
| ·NDV 的抗肿瘤机理 | 第20-21页 |
| ·NDV 应用于肿瘤治疗的安全性 | 第21-22页 |
| ·运用反向遗传操作技术改造 NDV 用于肿瘤治疗的进展 | 第22-23页 |
| ·自杀基因疗法（SGT）及胞嘧啶脱氨酶（CD） | 第23-24页 |
| ·自杀基因疗法 | 第23-24页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶和 CD/5-FC 系统 | 第24页 |
| ·研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 2 材料 | 第26-29页 |
| ·细胞株和质粒 | 第26页 |
| ·培养基及生化试剂 | 第26页 |
| ·鸡胚和实验动物 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第27-29页 |
| 3 方法 | 第29-42页 |
| ·CD 基因的克隆和序列比对分析 | 第29-31页 |
| ·大肠杆菌 JM109 菌株全基因组的提取 | 第29页 |
| ·CD 基因的 PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第30页 |
| ·CD 基因序列测定与结果分析 | 第30-31页 |
| ·pBrClone30-CD 全长 cDNA 克隆转录质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·CD 基因片段及 pBrClone30 载体片段的制备 | 第31页 |
| ·CD 基因片段和 pBrClone30 转录载体片段的连接 | 第31-32页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·CD 基因真核表达载体的构建 | 第32-35页 |
| ·CD、IRES-EGFP 基因片段和 pEE12.4 真核表达载体片段的制备 | 第32-33页 |
| ·CD、IRES-EGFP 基因片段和 pEE12.4 真核表达载体片段的连接 | 第33-34页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·CD 的生物学活性检测 | 第35-36页 |
| ·HepG2 细胞的转染 | 第35页 |
| ·MTT 法检测 pEE12.4IE-CD/5-FC 对 HepG2 的杀伤作用 | 第35-36页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD 的拯救及鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组 NDV 的拯救 | 第36页 |
| ·重组 NDV 的 RT-PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·拯救后重组 NDV 的 TCID50测定 | 第36-37页 |
| ·重组 NDV 的鸡胚内增殖稳定性检测 | 第37页 |
| ·重组 NDV 鸡胚内生长特性的测定 | 第37页 |
| ·MTT 法测定重组 NDV 对 HepG2 细胞的抑制作用 | 第37-38页 |
| ·5-FC 对昆明小鼠的安全性检测 | 第38-39页 |
| ·5-FC 的小鼠急性毒性（LD50）实验 | 第38页 |
| ·5-FC 静脉注射最大安全剂量测定 | 第38页 |
| ·最大安全剂量组小鼠的跟踪观察 | 第38-39页 |
| ·昆明小鼠 H22 肝癌荷瘤模型建立 | 第39页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD/5-FC 对小鼠 H22 荷瘤模型的抑制和存活率的提高作用 | 第39-40页 |
| ·尾静脉注射 5-FC 法 | 第39页 |
| ·瘤内注射 5-FC 法 | 第39-40页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD/5-FC 对实验小鼠存活率的提高作用 | 第40页 |
| ·实验小鼠血液中 5-FU 含量的测定 | 第40页 |
| ·肿瘤组织病理切片的制作与观察 | 第40页 |
| ·重组 NDV 的安全性检测 | 第40-42页 |
| ·重组 NDV 的毒性试验 | 第40-41页 |
| ·荷瘤小鼠组织器官的病毒检测 | 第41-42页 |
| 4 实验结果 | 第42-62页 |
| ·CD 基因的克隆与序列分析 | 第42-44页 |
| ·大肠杆菌 JM109 菌株全基因组的提取 | 第42页 |
| ·CD 基因的 PCR 扩增 | 第42页 |
| ·CD 基因序列测定与结果比对分析 | 第42-44页 |
| ·NDV pBrClone30-CD 基因组载体的构建和阳性重组质粒鉴定 | 第44-45页 |
| ·CD 基因片段和 pBrClone30/MCS 载体片段的制备 | 第44页 |
| ·pBrClone30-CD 阳性重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·CD 真核表达载体 pEE12.4IE-CD 的构建和阳性重组质粒鉴定 | 第45-46页 |
| ·CD 基因片段、IRES-EGFP 基因片段和 pEE12.4 载体片段的制备 | 第45页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·CD 的生物学活性检测 | 第46-48页 |
| ·HepG2 细胞的转染 | 第46页 |
| ·MTT 法检测 pEE12.4IE-CD/5-FC 对 HepG2 的杀伤作用 | 第46-48页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD 的拯救及鉴定 | 第48-51页 |
| ·重组 NDV 的拯救 | 第48页 |
| ·重组 NDV RT-PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组 NDV 的鸡胚内增殖稳定性检测 | 第49-50页 |
| ·重组 NDV 鸡胚内生长特性的测定 | 第50-51页 |
| ·MTT 法测定重组 NDV 对 HepG2 细胞的抑制作用 | 第51页 |
| ·5-FC 对昆明小鼠的安全性检测 | 第51-53页 |
| ·5-FC 的小鼠急性毒性（LD50）实验 | 第51-52页 |
| ·5-FC 静脉注射最大安全剂量测定 | 第52页 |
| ·最大安全剂量组小鼠的跟踪观察 | 第52-53页 |
| ·昆明小鼠 H22 肝癌荷瘤模型建立 | 第53-54页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD/5-FC 对小鼠 H22 荷瘤模型的抑制和存活率提高作用 | 第54-58页 |
| ·尾静脉注射 5-FC 法 | 第54-55页 |
| ·瘤内注射 5-FC 法 | 第55-57页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD/5-FC 对实验小鼠存活率的提高作用 | 第57-58页 |
| ·实验小鼠血液中 5-FU 含量的测定 | 第58-59页 |
| ·肿瘤组织病理切片的观察 | 第59-60页 |
| ·重组 NDV 的安全性检测 | 第60-62页 |
| ·重组 NDV 的毒性试验 | 第60-61页 |
| ·荷瘤小鼠组织器官的病毒检测 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-66页 |
| ·NDV 毒株的选择 | 第62页 |
| ·选择插入 CD 外源基因 | 第62页 |
| ·携带 CD 基因载体的选择 | 第62-63页 |
| ·外源基因插入位置的选择 | 第63页 |
| ·重组 NDV 的拯救 | 第63页 |
| ·重组 NDV 的鉴定及病毒活性分析 | 第63-64页 |
| ·重组 NDV 对肿瘤细胞的抑制作用 | 第64页 |
| ·昆明小鼠 H22 肝癌荷瘤模型的建立 | 第64页 |
| ·重组 NDV rClone30-CD/5-FC 对小鼠 H22 荷瘤模型的抑制和存活率提高作用 | 第64-65页 |
| ·实验小鼠血液中 5-FU 含量的测定 | 第65页 |
| ·重组 NDV 的安全性检测 | 第65-66页 |
| 6 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 A | 第73-76页 |
| 附录 B | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77页 |
