| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 硫酸软骨素概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 硫酸软骨素简介 | 第9页 |
| 1.1.2 硫酸软骨素应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 硫酸软骨素生产方法 | 第10-11页 |
| 1.2 软骨素-4-O-磺基转移酶-1概述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 软骨素-4-O-磺基转移酶-1简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 软骨素-4-O-磺基转移酶-1研究进展 | 第12页 |
| 1.3 异源蛋白在E.coli中可溶性表达策略 | 第12-13页 |
| 1.3.1 选择合适的宿主 | 第12页 |
| 1.3.2 融合表达 | 第12-13页 |
| 1.3.3 共表达分子伴侣 | 第13页 |
| 1.4 异源蛋白在Pichia pastoris中高效表达策略 | 第13页 |
| 1.4.1 选择合适的信号肽 | 第13页 |
| 1.4.2 选择合适的启动子 | 第13页 |
| 1.4.3 培养条件优化 | 第13页 |
| 1.5 立题背景与意义 | 第13-14页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-20页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15-17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基及溶液配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 分子生物学操作 | 第20-21页 |
| 2.2.2 目的基因的获得 | 第21页 |
| 2.2.3 重组载体的构建 | 第21-25页 |
| 2.2.4 E.coli重组菌株的转化与诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.5 P.pastoris重组表达菌株的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组载体粗酶液制备及其SDS-PAGE检测 | 第26页 |
| 2.2.7 CSA二糖单位结构鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.8 酶活测定 | 第27页 |
| 2.2.9 P.pastoris生物量的测定 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-46页 |
| 3.1 C4ST-1在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第28-35页 |
| 3.1.1 不同融合标签对C4ST-1在E.coli BL21(DE3)中表达的影响 | 第28-30页 |
| 3.1.2 C4ST-1在E.coli BL21(DE3)表达的定性和定量分析 | 第30-31页 |
| 3.1.3 分子伴侣Erv1p和 Dsb C对 C4ST-1 表达的影响 | 第31-35页 |
| 3.1.4 小结 | 第35页 |
| 3.2 C4ST-1在P.pastoris GS115 中的诱导表达优化 | 第35-42页 |
| 3.2.1 可溶性标签Trx A和 SUMO对 C4ST-1在P.pastoris GS115 中表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.2 不同类型的信号肽对C4ST-1在P.pastoris GS115 中表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.3 P.pastoris GS115-p PIC9K-α(VAVE)-SUMO-C4ST-1 的摇瓶发酵优化 | 第38-41页 |
| 3.2.4 P.pastoris GS115-p PIC9K-α(VAVE)-SUMO-C4ST-1的3 L发酵罐放大培养 | 第41-42页 |
| 3.2.5 小结 | 第42页 |
| 3.3 C4ST-1在P.pastoris GS115 中的组成型表达 | 第42-46页 |
| 3.3.1 组成型重组P.pastoris菌株的构建、转化与筛选 | 第43页 |
| 3.3.2 组成型重组P.pastoris菌株的摇瓶发酵 | 第43-44页 |
| 3.3.3 小结 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 :作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
