| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-12页 |
| 第一部分 绪论 | 第12-23页 |
| ·TNF-α的研究现状 | 第12-16页 |
| ·TNF-α的特性与结构 | 第12-13页 |
| ·TNF-α的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·TNF-α在炎症性疾病中的作用 | 第14页 |
| ·TNF-α受体 | 第14-15页 |
| ·TNF-α及其受体在RA中的表达及作用 | 第15-16页 |
| ·抗TNF-α制剂治疗RA的现状 | 第16-17页 |
| ·Etanercept(依那西普) | 第16页 |
| ·Infliximab(英夫利西) | 第16-17页 |
| ·Adalimumab(阿达木) | 第17页 |
| ·纤维连接蛋白结构域B(extra-domain B of fibronectin,ED-B) | 第17-20页 |
| ·纤维粘连蛋白(fibronectin,FN) | 第17-18页 |
| ·ED-B结构 | 第18-19页 |
| ·ED-B分布、特性及应用 | 第19-20页 |
| ·双功能抗体及靶向治疗 | 第20-21页 |
| ·主要研究内容和意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·材料 | 第23-28页 |
| ·质粒、菌株和细胞株 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第24-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-38页 |
| ·TA克隆：T-aED-B,T-aTNF-α | 第28-30页 |
| ·重组质粒pSM-aED-B的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pSM-aEBTA的构建 | 第31页 |
| ·大肠杆菌工程菌的构建及表达产物的鉴定 | 第31-33页 |
| ·双功能抗体aEBTA的纯化与复性 | 第33-36页 |
| ·双功能抗体aEBTA的活性分析 | 第36-38页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第38-51页 |
| ·TA克隆结果分析 | 第38-40页 |
| ·T-aED-B菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·T-aTNF-α菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pSM-aED-B鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pSM-aEBTA鉴定 | 第41-44页 |
| ·重组质粒pSM-aEBTA菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒pSM-aEBTA酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pSM-aEBTA测序 | 第42-44页 |
| ·重组大肠杆菌表达产物的分析与鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达产物aEBTA的SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| ·表达产物aEBTA的Western Blotting鉴定 | 第44-45页 |
| ·双功能抗体aEBTA纯化与复性 | 第45-47页 |
| ·双功能抗体aEBTA纯化 | 第45-46页 |
| ·复性蛋白的超滤浓缩与浓度测定 | 第46-47页 |
| ·双功能抗体aEBTA的活性分析 | 第47-51页 |
| ·直接ELISA检测双功能抗体aEBTA与TNF-α结合 | 第47页 |
| ·MTT法检测双功能抗体aEBTA中和rhTNF-α对L929细胞的细胞毒作用 | 第47-49页 |
| ·免疫组化染色法检aEBTA与关节滑膜中ED-B的结合 | 第49-51页 |
| 第四部分 总结与讨论 | 第51-53页 |
| ·总结 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
