| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·研究的目的及意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-23页 |
| ·葡萄糖氧化酶研究进展 | 第13-17页 |
| ·丝状真菌表达系统研究进展 | 第17-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌种及载体 | 第24页 |
| ·试剂及酶类 | 第24页 |
| ·常用试剂的配置 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-35页 |
| ·黑曲霉基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·基因克隆与扩增 | 第26-31页 |
| ·GOD基因在毕赤酵母中的表达 | 第31-32页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立 | 第32页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第32-34页 |
| ·培养基和培养条件对黑曲霉转化子酶活性的影响 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-56页 |
| ·GOD基因在毕赤酵母中的表达 | 第35-40页 |
| ·黑曲霉基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·GOD基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·GOD基因毕赤酵母表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第39页 |
| ·毕赤酵母转化子的鉴定 | 第39-40页 |
| ·GOD基因黑曲霉表达载体的构建 | 第40-46页 |
| ·GOD基因与5'Gla及3’Gla的扩增 | 第40-41页 |
| ·5’Gla与GOD及GOD与3’Gla的重叠延伸 | 第41-45页 |
| ·表达载体pSZH-GOD的构建 | 第45-46页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立 | 第46-47页 |
| ·潮霉素B对黑曲霉抑制浓度的确定 | 第46页 |
| ·头孢噻肟钠对农杆菌的抑制浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化 | 第47-51页 |
| ·表达载体pSZH-GOD冻融法转化农杆菌 | 第47-48页 |
| ·农杆菌转化子与黑曲霉的共培养 | 第48页 |
| ·黑曲霉转化子的筛选 | 第48-49页 |
| ·黑曲霉转化子的PCR鉴定及纯合同源重组转化子的筛选 | 第49-51页 |
| ·黑曲霉转化子酶活的测定 | 第51页 |
| ·培养基和培养条件对黑曲霉转化子酶活性的影响 | 第51-56页 |
| ·培养时间对转化子产酶量的影响 | 第51-52页 |
| ·pH对转化子产酶量影响 | 第52-53页 |
| ·Triton对转化子产酶量的影响 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| ·GOD基因在毕赤酵母与黑曲霉中的表达 | 第56页 |
| ·重叠延伸PCR的使用 | 第56页 |
| ·农杆菌介导的黑曲霉遗传转化 | 第56-57页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| ·基因的克隆与扩增 | 第58页 |
| ·GOD基因在毕赤酵母中的表达 | 第58页 |
| ·GOD基因在黑曲霉中的表达 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66页 |