| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| ·产气荚膜梭菌病的流行病学 | 第12-13页 |
| ·产气荚膜梭菌的生物学特性及外毒素的研究进展 | 第13-15页 |
| ·产气荚膜梭菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·产气荚膜梭菌的外毒素及其相关疾病 | 第14-15页 |
| ·产气荚膜梭菌ε毒素研究进展 | 第15-17页 |
| ·ε毒素的结构及免疫原性 | 第15-16页 |
| ·ε毒素的生物学特性与致病机理 | 第16页 |
| ·ε毒素的临床症状 | 第16-17页 |
| ·ε毒素疫苗的研究进展 | 第17页 |
| ·乳酸杆菌用作活疫苗传递载体的研究进展 | 第17-21页 |
| ·乳酸杆菌的分子生物学和生化性质 | 第18页 |
| ·乳杆菌的粘附性和定植能力 | 第18页 |
| ·乳酸杆菌免疫原性和佐剂性 | 第18-19页 |
| ·乳酸杆菌作为活疫苗传递载体的特点 | 第19页 |
| ·乳酸杆菌作为活疫苗传递载体的应用 | 第19-20页 |
| ·乳酸菌与胃肠道黏膜免疫 | 第20-21页 |
| ·乳酸菌作为口服疫苗的展望 | 第21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料及方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·引物及序列合成 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·表达产气荚膜梭菌ε毒素突变基因(mε)重组大肠杆菌的构建 | 第23-28页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导及表达蛋白的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组大肠杆菌免疫学指标的测定 | 第29-31页 |
| ·表达产气荚膜梭菌ε毒素突变基因重组戊糖乳杆菌及干酪乳杆菌的构建 | 第31-33页 |
| ·重组戊糖乳杆菌与重组干酪乳杆菌的诱导及表达蛋白的鉴定 | 第33-34页 |
| ·口服重组乳酸杆菌免疫学指标的测定 | 第34-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-54页 |
| ·A段的PCR扩增结果 | 第36页 |
| ·B段的PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| ·ε毒素突变基因(mε)的PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pMD18-T-mε的鉴定结果 | 第38页 |
| ·大肠杆菌重组质粒pET-28a-mε的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·重组大肠杆菌表达蛋白的鉴定 | 第39-43页 |
| ·SDS-PAGE鉴定结果 | 第39-42页 |
| ·表达产物westen blot鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·间接ELISA法测定免疫兔血清抗体效价结果 | 第43-44页 |
| ·产气荚膜梭菌毒素D型培养上清致死量测定结果 | 第44页 |
| ·免疫兔血清抗体中和试验结果 | 第44-45页 |
| ·重组乳酸菌的鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·重组乳酸杆菌表达蛋白的鉴定 | 第46-48页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·重组戊糖乳杆菌及重组干酪乳杆菌表达产物的western blot鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组菌乳酸菌口服免疫小鼠特异性抗体检测结果 | 第48-52页 |
| ·免疫小鼠粪便中抗ε毒素的特异性sIgA检测结果 | 第48-49页 |
| ·免疫小鼠鼻腔冲洗液、阴道冲洗液中抗ε毒素特异性sIgA测定结果 | 第49-51页 |
| ·免疫小鼠血清中抗ε毒素的特异性IgG检测结果 | 第51-52页 |
| ·重组乳酸菌免疫小鼠攻毒试验结果 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| ·构建产气荚膜梭菌mε毒素重组乳酸菌表达系统的立足点 | 第54-55页 |
| ·产气荚膜梭菌mε毒素在大肠杆菌中的表达及免疫效果的分析 | 第55-56页 |
| ·口服重组乳酸杆菌免疫效果的分析及评价 | 第56-58页 |
| ·本课题的研究思路与展望 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录A：培养基的配制 | 第67-69页 |
| 附录B：主要试剂的配制 | 第69-72页 |
| 附录C：产气荚膜梭菌mε毒素全基因测序结果 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
