| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-43页 |
| ·转基因动物 | 第16-26页 |
| ·转基因动物的发展史 | 第16-18页 |
| ·转基因动物的制备方法 | 第18-22页 |
| ·转基因动物的鉴定手段 | 第22-24页 |
| ·转基因对转基因动物的影响 | 第24-25页 |
| ·转基因动物的生物安全性 | 第25-26页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器 | 第26-33页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的优势及研究进展 | 第27-29页 |
| ·乳腺生物反应器高效表达的决定因素 | 第29-33页 |
| ·干扰素 | 第33-41页 |
| ·干扰素的发现及分类 | 第33页 |
| ·干扰素诱生过程的信号路径 | 第33-34页 |
| ·干扰素活性的作用机制 | 第34-35页 |
| ·干扰素的应答基因生物活性 | 第35-38页 |
| ·IFNα--2b简介 | 第38-39页 |
| ·干扰素的生产状况 | 第39-40页 |
| ·干扰素活性测定方法 | 第40-41页 |
| ·转干扰素基因水牛制备的目的和意义 | 第41-43页 |
| 第二章 乳腺特异表达调控元件的克隆、活性验证及表达载体的构建 | 第43-61页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| ·材料与试剂 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·液基因组DNA的提取,各个片段的PCR扩增及测序 | 第45-46页 |
| ·启动子活性分析 | 第46-47页 |
| ·人IFNα-2b基因原核表达验证 | 第47-48页 |
| ·乳腺特异表达载体的构建及测序分析 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-57页 |
| ·PCR扩增结果及测序结果 | 第49页 |
| ·启动子活性分析结果 | 第49-52页 |
| ·人IFNα-2b基因的原核表达分析 | 第52页 |
| ·乳腺特异表达载体的构建及测序检测 | 第52-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第三章 IFNα-2b乳腺特异表达载体表达效率的检测 | 第61-76页 |
| 摘要 | 第61-62页 |
| ·材料与试剂 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-66页 |
| ·G418对Bcap-37细胞的毒性试验 | 第62-63页 |
| ·Bcap-37细胞的转染及筛选 | 第63页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR检测 | 第63页 |
| ·EGFP阳性细胞株IFNα-2b表达的检测 | 第63-65页 |
| ·细胞培养液中重组人IFNα-2b的活性测定 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-72页 |
| ·G418毒性试验结果 | 第66页 |
| ·Bcap-37细胞的转染筛选 | 第66-67页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR检测 | 第67-68页 |
| ·EGFP阳性细胞株表达IFNα-2b的检测 | 第68-71页 |
| ·阳性细胞系表达的IFNα-2b的活性检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第74-76页 |
| 第四章 转基因小鼠模型的制备与检测 | 第76-99页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| ·材料与试剂 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-83页 |
| ·转基因载体改造 | 第77-78页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第78页 |
| ·转基因小鼠的PCR鉴定 | 第78页 |
| ·转基因小鼠的Southern blot鉴定 | 第78-79页 |
| ·转基因小鼠的扩大繁育 | 第79页 |
| ·转基因小鼠整合拷贝数的检测 | 第79-80页 |
| ·转基因整合位点的检测 | 第80-81页 |
| ·转基因载体中启动子的甲基化状态检测 | 第81页 |
| ·转基因小鼠乳腺及其它组织表达IFNα-2b的检测 | 第81-82页 |
| ·转基因小鼠乳汁中IFNα-2b表达的Western blot检测 | 第82页 |
| ·转基因泌乳期母鼠乳腺的免疫组化分析 | 第82页 |
| ·转基因小鼠乳汁中表达IFNα-2b的ELISA定量 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-96页 |
| ·转基因小鼠制备用载体的改造与纯化 | 第83页 |
| ·转基因小鼠的PCR检测 | 第83-84页 |
| ·转基因小鼠的Southern blot检测 | 第84-85页 |
| ·转基因整合拷贝数的测定 | 第85-86页 |
| ·转基因整合位点的检测 | 第86-90页 |
| ·转基因甲基化状态的检测 | 第90-92页 |
| ·转基因小鼠乳腺及其它组织中IFNα-2b表达的RT-PCR检测 | 第92页 |
| ·转基因小鼠乳汁Western blot检测 | 第92-93页 |
| ·转基因小鼠乳腺石蜡切片及免疫组化检测 | 第93-95页 |
| ·转基因小鼠乳汁中IFNα-2b的ELISA定量检测 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·结论 | 第98-99页 |
| 第五章 转基因小鼠表达重组人IFNα-2b的生物学活性检测 | 第99-113页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| ·材料与试剂 | 第100页 |
| ·方法 | 第100-102页 |
| ·MxA基因启动子的克隆及活性检测 | 第100-101页 |
| ·MxA基因启动子中ISRE元件对IFNa-2b的应答活性检测 | 第101页 |
| ·转基因小鼠乳汁的重组IFNα-2b活性定量 | 第101-102页 |
| ·转基因小鼠乳汁中重组IFNα-2b诱导下游基因的表达检测 | 第102页 |
| ·结果 | 第102-109页 |
| ·MxA基因启动子的活性检测 | 第102-105页 |
| ·MxA基因启动子中ISRE元件应答IFNα-2b的检测 | 第105-106页 |
| ·转基因小鼠乳汁的重组IFNα-2b活性的测量 | 第106-107页 |
| ·转基因小鼠乳汁中重组IFNα-2b诱导其下游基因表达的检测 | 第107-109页 |
| ·讨论 | 第109-112页 |
| ·结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 附录 | 第128-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 博士在读期间发表的文章及专利 | 第134页 |
