| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 一、前言 | 第11-32页 |
| (一) 我国马铃薯生产现状 | 第11页 |
| (二) 马铃薯主要的真细菌病害 | 第11-18页 |
| 1. 马铃薯晚疫病 | 第11-13页 |
| 2. 马铃薯干腐病 | 第13-15页 |
| 3. 马铃薯黑痣病 | 第15-16页 |
| 4. 马铃薯青枯病 | 第16-17页 |
| 5. 马铃薯软腐病 | 第17-18页 |
| (三) 马铃薯脱毒种薯国家标准 | 第18-20页 |
| (四) 病原菌检测的主要手段 | 第20-31页 |
| 1. 症状目测鉴别法 | 第20-21页 |
| 2. 传统的病菌鉴定检测方法 | 第21-24页 |
| ·革兰氏染色法 | 第21-22页 |
| ·其他染色法 | 第22-23页 |
| ·芽孢染色法 | 第22页 |
| ·荚膜染色法 | 第22-23页 |
| ·鞭毛染色法 | 第23页 |
| ·马铃薯种薯块茎晚疫病的检测方法 | 第23页 |
| ·生物测定法 | 第23-24页 |
| 3. 血清学检测方法 | 第24-26页 |
| ·乳胶凝集试验法 | 第24页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第24-25页 |
| ·DAS-ELISA | 第25页 |
| ·NCM-ELISA | 第25页 |
| ·免疫荧光检测法 | 第25-26页 |
| 4. 分子生物学检测方法 | 第26-31页 |
| ·限制片段长度多态性分析 | 第26-27页 |
| ·核酸杂交技术 | 第27页 |
| ·聚合酶链式反应核酸扩增技术 | 第27-31页 |
| ·传统的PCR | 第27-29页 |
| ·巢式PCR | 第29页 |
| ·多重PCR | 第29-30页 |
| ·实时定量PCR | 第30-31页 |
| (五) 研究内容 | 第31-32页 |
| 二、实验材料和方法 | 第32-47页 |
| (一) 材料来源 | 第32-33页 |
| 1. 供试标准菌株 | 第32页 |
| 2. 样品的采集 | 第32-33页 |
| (二) 马铃薯主要真细菌病原菌的分离培养与保存 | 第33-36页 |
| 1. 马铃薯晚疫病的分离纯化 | 第33-34页 |
| 2. 马铃薯干腐病的分离纯化 | 第34页 |
| 3. 马铃薯黑痣病的分离纯化 | 第34-35页 |
| 4. 马铃薯软腐、黑胫病菌的分离纯化 | 第35页 |
| 5. 马铃薯青枯病菌的分离纯化 | 第35-36页 |
| 6. 菌种保存 | 第36页 |
| (三) DNA提取 | 第36-39页 |
| 1. 晚疫病菌基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| 2. 镰刀菌DNA的提取 | 第37页 |
| 3. 马铃薯及黑痣病菌DNA的提取 | 第37-38页 |
| 4. 细菌基因组或质粒DNA的提取 | 第38-39页 |
| (四) 马铃薯主要病原菌的鉴定 | 第39-42页 |
| 1. 形态学鉴定 | 第39-41页 |
| ·马铃薯晚疫病菌形态结构 | 第39页 |
| ·马铃薯干腐病菌形态结构 | 第39-40页 |
| ·马铃薯黑痣病菌形态结构 | 第40页 |
| ·马铃薯软腐病菌形态结构 | 第40-41页 |
| ·马铃薯青枯病菌形态结构 | 第41页 |
| 2. 常规PCR鉴定 | 第41-42页 |
| (五) Real time PCR体系的建立 | 第42-47页 |
| 1. real-time PCR引物与Taqman探针的设计 | 第42-44页 |
| 2. Real time PCR体系的建立 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR | 第44页 |
| ·病原菌引物-探针的特异性 | 第44页 |
| ·重复性 | 第44-45页 |
| ·标准曲线 | 第45页 |
| 3. Taqman双重Real time PCR的建立 | 第45-46页 |
| 4. Real time PCR与普通PCR灵敏度比较 | 第46页 |
| 5. PCR抑制分析 | 第46-47页 |
| 三、结果与讨论 | 第47-62页 |
| (一) 马铃薯主要真细菌的分离鉴定 | 第47-49页 |
| 1. 分离获得的菌株 | 第47页 |
| 2. 菌株的PCR鉴定 | 第47-49页 |
| (二) Real time PCR体系的建立 | 第49-59页 |
| 1. 染料法定量PCR | 第49-50页 |
| 2. 探针法定量PCR | 第50-55页 |
| ·病原菌引物-探针的特异性 | 第50-51页 |
| ·重复性 | 第51-52页 |
| ·标准曲线 | 第52-55页 |
| 3. Taqman双重Real time PCR的建立 | 第55页 |
| 4. Real time PCR与普通PCR灵敏度比较 | 第55-57页 |
| 5. PCR抑制分析 | 第57-59页 |
| (三) 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录1 培养基配方 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
