| 缩略语 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一部分 shRNA对人黑素瘤细胞BRAF基因沉默作用的体内外研究 | 第15-48页 |
| 第一节 实验试剂及仪器 | 第15-21页 |
| 一、主要试剂及溶液的配置 | 第15-21页 |
| 二、主要仪器及耗材 | 第21页 |
| 第二节 实验方法 | 第21-30页 |
| 一、特异性发卡状shRNA编码序列的设计、合成、筛选、纯化、鉴定和测序 | 第21-23页 |
| 二、质粒扩增和抽提 | 第23页 |
| 三、质粒转染 | 第23-24页 |
| 四、抗性克隆的筛选 | 第24页 |
| 五、裸鼠成瘤实验 | 第24-25页 |
| 六、荷瘤裸鼠治疗实验 | 第25页 |
| 七、半定量RT-PCR | 第25-27页 |
| 八、Western blotting | 第27-30页 |
| 第三节 结果 | 第30-43页 |
| 一、质粒体外转染效率 | 第30-31页 |
| 二、裸鼠成瘤试验 | 第31-34页 |
| 三、荷瘤鼠治疗试验 | 第34-38页 |
| 四、蛋白定量 | 第38-39页 |
| 五、shRNA在体外对A375细胞BRAF基因mRNA和蛋白表达的抑制效果 | 第39-41页 |
| 六、裸鼠瘤体中BRAF基因mRNA和蛋白表达 | 第41-43页 |
| 第四节 讨论 | 第43-46页 |
| 一、siRNA导入细胞和稳定转染细胞的筛选 | 第43-45页 |
| 二、干扰后BRAF基因的表达 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第二部分 干扰BRAFV599E突变基因对人黑素瘤细胞体内外侵袭作用的影响机制初探 | 第48-57页 |
| 第一节 实验试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 一、主要试剂及溶液的配置 | 第48-49页 |
| 二、主要仪器及耗材 | 第49页 |
| 第二节 实验方法 | 第49-51页 |
| 一、质粒转染 | 第49页 |
| 二、Transwell小室体外侵袭试验 | 第49-50页 |
| 三、明胶酶谱 | 第50页 |
| 四、肿瘤体内转移实验 | 第50页 |
| 五、半定量RT-PCR | 第50-51页 |
| 六、Western blotting | 第51页 |
| 第三节 结果 | 第51-55页 |
| 一、Transwell小室体外侵袭试验 | 第51-52页 |
| 二、干扰BRAF基因对肿瘤的明胶酶酶活性的影响 | 第52-53页 |
| 三、干扰BRAF基因对肿瘤MMP-2和VEGFmRNA和蛋白体内外表达的影响 | 第53-55页 |
| 四、干扰BRAF基因对肿瘤细胞体内转移能力的影响 | 第55页 |
| 第四节 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 全文小结 | 第60-61页 |
| 论文相关综述 | 第61-68页 |
| 博士期间发表文章及参加学术活动情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
