利用RNA干扰技术抑制四九菜心中黑芥子酶基因的表达

中文摘要	第1-9页
英文摘要	第9-10页
1 前言	第10-16页
·硫代葡萄糖苷	第10-12页
·黑芥子酶及其性质	第12-14页
·黑芥子酶的分布	第12页
·黑芥子酶基因家族	第12-13页
·黑芥子酶复合体	第13页
·黑芥子酶的结构及其活性的影响因素	第13-14页
·黑芥子酶-硫代葡萄糖苷系统在植物中的防御作用	第14-15页
·本研究的目的和意义	第15-16页
2 材料与方法	第16-40页
·材料	第16-19页
·质粒与菌种	第16页
·供试蔬菜	第16页
·生化试剂与酶类	第16页
·其他试剂及溶液	第16-18页
·主要培养基配置	第18-19页
·主要仪器设备	第19页
·方法	第19-26页
·四九菜心总RNA的提取	第19-20页
·四九菜心基因组DNA的提取	第20页
·总RNA和总DNA的定性定量	第20页
·第一链cDNA的合成	第20-21页
·引物设计与合成	第21-22页
·扩增黑芥子酶基因片段MY的引物	第21-22页
·扩增用于做杂交探针的黑芥子酶基因片段MS的引物	第22页
·检测RNAi结构元件完整性的引物	第22页
·琼脂糖凝胶电泳分析	第22页
·琼脂糖凝胶上DNA片段的回收	第22-23页
·大肠杆菌感受态的制备	第23页
·DNA片段的连接及转化	第23-24页
·大肠杆菌质粒DNA的提取	第24-25页
·根癌农杆菌GV3101感受态的制备	第25-26页
·冻融法介导的质粒转化根癌农杆菌	第26页
·RNA干扰载体的构建	第26-31页
·目的基因的获得	第26页
·克隆载体的构建	第26-29页
·植物表达载体的构建	第29-31页
·四九菜心遗传转化体系的构建	第31-33页
·无菌苗的获得	第31-32页
·外植体的选择与培养	第32页
·诱导培养基的选择	第32页
·潮霉素筛选浓度的确定	第32页
·用于侵染外植体的根癌农杆菌菌株的准备	第32-33页
·外植体的转化与筛选	第33页
·转基因植株的分子生物学鉴定	第33-40页
·PCR检测	第33-34页
·Southern杂交	第34-38页
·基因组DNA的制备	第34页
·基因组DNA的限制酶切	第34页
·基因组DNA消化产物的琼脂糖凝胶电泳	第34页
·DIG标记探针	第34-35页
·标记结果的检测	第35-36页
·转膜——采用经典的盐桥法	第36-37页
·杂交	第37-38页
·免疫检测	第38页
·Northern杂交	第38-40页
·器皿和容器的处理	第38页
·RNA的提取	第38页
·探针制备	第38页
·甲醛变性电泳	第38-39页
·RNA转膜	第39-40页
·杂交	第40页
·免疫检测	第40页
3 结果与分析	第40-48页
·黑芥子酶基因片段MY的克隆	第40页
·克隆载体的酶切验证与PCR检测	第40-42页
·植物表达载体的酶切验证	第42-43页
·四九菜心遗传转化体系的优化	第43-46页
·诱导培养基的筛选	第43-45页
·潮霉素筛选浓度的确定	第45-46页
·转基因植株的分子检测	第46-48页
·转基因植株PCR检测	第46页
·转基因植株的Southern杂交检测	第46-48页
·转基因植株的Northern杂交检测	第48页
4 讨论	第48-52页
·RNAi技术在植物功能基因研究中的应用	第48-49页
·四九菜心遗传转化体系的优化	第49-50页
·黑芥子酶—硫代葡萄糖苷防御系统	第50-51页
·需继续开展的研究	第51-52页
参考文献	第52-62页
附录	第62-66页
致谢	第66页