| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 文献综述 | 第12-31页 |
| 第一章 猪瘟病毒研究进展 | 第12-26页 |
| ·猪瘟概述 | 第12-13页 |
| ·猪瘟病毒 | 第13-14页 |
| ·CSFV 的形态 | 第13页 |
| ·CSFV 的理化特征 | 第13页 |
| ·CSFV 的抗原性、毒力和分型 | 第13-14页 |
| ·CSFV 的培养细胞 | 第14页 |
| ·CSFV 的分子生物学研究 | 第14-26页 |
| ·CSFV 的基因组结构 | 第14页 |
| ·非翻译区 | 第14-19页 |
| ·5’-UTR | 第15-17页 |
| ·3’-UTR | 第17-19页 |
| ·N53 蛋白 | 第19-22页 |
| ·NS3 蛋白的蛋白酶功能 | 第19-20页 |
| ·NS3 蛋白的NTPASE/HELICASE 功能 | 第20-21页 |
| ·NS3 蛋白的其他研究 | 第21-22页 |
| ·NS3 与致细胞病变型病毒 | 第22-26页 |
| 第二章 RNA 干扰抗病毒的研究进展 | 第26-31页 |
| ·RNA 干扰的发现 | 第26页 |
| ·RNA 干扰的机制 | 第26-27页 |
| ·RNAI 的特征 | 第27页 |
| ·RNA 干扰的抗病毒应用 | 第27-29页 |
| ·以阻断宿主细胞表面受体功能抗病毒感染 | 第28页 |
| ·以抑制病毒复制抗病毒感染 | 第28-29页 |
| ·RNAI 抗病毒作用面临的挑战 | 第29-30页 |
| ·病毒基因组核苷酸的快速变异介导的RNAI 屏蔽作用 | 第29-30页 |
| ·病毒产生蛋白质介导的RNAI 屏蔽作用 | 第30页 |
| ·病毒核衣壳介导的RNAI 屏蔽作用 | 第30页 |
| ·局部RNA 空间结构改变介导的RNAI 屏蔽作用 | 第30页 |
| ·病毒逃逸 | 第30页 |
| ·针对RNAI 抗性的一些解决办法 | 第30-31页 |
| 试验研究 | 第31-66页 |
| 第三章 CSFV SHIMEN 株 N53 基因真核表达载体的构建与纯化 | 第31-44页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·质粒与菌株 | 第31页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第31-33页 |
| ·载体构建用工具酶和试剂 | 第31页 |
| ·LB 培养基 | 第31-32页 |
| ·溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ | 第32页 |
| ·饱和平衡酚/氯仿/异戊醇 | 第32页 |
| ·10×TE、50×TAE 缓冲液 | 第32页 |
| ·质粒纯化试剂 | 第32页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第32-33页 |
| ·细胞消化试剂 ATV | 第33页 |
| ·主要仪器与设备 | 第33页 |
| ·方法与步骤 | 第33-38页 |
| ·NS3 片段的扩增与回收 | 第33-35页 |
| ·CSFV 总RNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第35页 |
| ·目的基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物与PMD19-T SIMPLER VECTOR 的连接 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·阳性重组表达质粒及PEGFP-C1 质粒的纯化 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·RT-PCR 产物的电泳结果 | 第38页 |
| ·目的片段的克隆与鉴定 | 第38-41页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的测序鉴定结果 | 第39-41页 |
| ·重组表达质粒的鉴定与纯化结果 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定结果 | 第41页 |
| ·重组表达质粒及PEGFP-C1 质粒的纯化结果 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·RT-PCR NS3 基因 | 第41-42页 |
| ·PMD19-T SIMPLER VECTOR 和PEGFP-C1 | 第42页 |
| ·质粒纯化 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第四章 CSFV NS3 蛋白的表达及对 PK-15 细胞作用的研究 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·质粒与细胞 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·方法与步骤 | 第45-49页 |
| ·新霉素（G418）最佳筛选浓度的确定 | 第45页 |
| ·PEGFP-N53 及PEGFP-C1 质粒转染 PK-15 细胞 | 第45-46页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞的获得 | 第46页 |
| ·表达蛋白的检测 | 第46-49页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第46-48页 |
| ·WESTERN BLOT 分析 | 第48-49页 |
| ·N53 蛋白对宿主细胞PK-15 的作用研究 | 第49页 |
| ·显微镜检测 | 第49页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-53页 |
| ·新霉素（G418）对PK-15 细胞最佳筛选浓度的确定 | 第49页 |
| ·转染成功的鉴定及转染条件的确定 | 第49-50页 |
| ·转染后阳性细胞的获得 | 第50-51页 |
| ·转染后NS3 表达蛋白检测结果 | 第51页 |
| ·NS3 表达蛋白的SDS-PAGE 结果 | 第51页 |
| ·NS3 表达蛋白的WESTERN-BLOT 结果 | 第51页 |
| ·NS3 蛋白对宿主细胞PK-15 的作用研究结果 | 第51-53页 |
| ·显微镜观察结果 | 第51-52页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·脂质体介导的基因转染 | 第53-54页 |
| ·G418 抗性筛选 | 第54页 |
| ·表达NS3 蛋白阳性细胞的获得 | 第54-55页 |
| ·NS3 蛋白与细胞凋亡 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 转录靶向CSFV 3’-UTR SHRNA 细胞株的建立 | 第57-66页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·质粒、毒株、菌株与细胞 | 第58页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第58页 |
| ·仪器与设备 | 第58页 |
| ·方法与步骤 | 第58-60页 |
| ·猪瘟病毒3’-UTR 干扰片段的设计 | 第58-59页 |
| ·重组干扰质粒的构建与鉴定 | 第59页 |
| ·重组干扰质粒的纯化 | 第59页 |
| ·重组干扰质粒的转染 | 第59页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞的获得 | 第59页 |
| ·稳定转录靶向猪瘟病毒3’-UTR SHRNA PK-15 细胞株的获得 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·重组干扰质粒的鉴定 | 第60页 |
| ·重组干扰质粒的纯化 | 第60-61页 |
| ·重组干扰质粒转染结果 | 第61页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞的获得 | 第61-62页 |
| ·转录靶向猪瘟病毒3’-UTR SHRNA PK-15 细胞株的获得 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·SIRNA 的制备 | 第63-64页 |
| ·靶向CSFV 3’-UTR 干扰位点的选择 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简介 | 第77页 |
