| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·伪狂犬病病原学 | 第12-13页 |
| ·伪狂犬病流行病学 | 第13-15页 |
| ·众多的传播途径和方式 | 第14页 |
| ·流行特点与发展趋势 | 第14-15页 |
| ·伪狂犬病毒(PRV)的潜伏感染 | 第15-16页 |
| ·PRV潜伏感染的建立,维持与激活 | 第15页 |
| ·PRV潜伏感染的相关基因 | 第15-16页 |
| ·RNA干扰技术 | 第16-21页 |
| ·RNA干扰技术的原理 | 第17-18页 |
| ·RNA干扰技术的特点 | 第18-20页 |
| ·RNA干扰技术的研究方法 | 第20-21页 |
| ·RNA干扰分子的设计 | 第20页 |
| ·siRNA的合成 | 第20-21页 |
| ·RNA干扰技术的应用及研究展望 | 第21-25页 |
| ·基因功能研究 | 第21-22页 |
| ·抗病毒作用 | 第22-23页 |
| ·基因治疗的新手段 | 第23页 |
| ·全基因组基因功能扫描 | 第23-24页 |
| ·蛋白质功能的研究 | 第24页 |
| ·展望 | 第24-25页 |
| 2 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 3 伪狂犬病毒EP0基因的原核表达与抗体制备 | 第26-37页 |
| ·材料和方法 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·酶及主要试剂 | 第26页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第26-27页 |
| ·包涵体制备相关溶液 | 第27页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blot相关溶液 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·质粒的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·质粒的小量制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达与样本处理 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| ·不溶性包涵体的制备 | 第30-31页 |
| ·ELISA最佳包被浓度的确定(方阵滴定) | 第31页 |
| ·ELISA的操作步骤 | 第31页 |
| ·EP0抗体的制备 | 第31-32页 |
| ·Western-blot | 第32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·pET-EP0重组质粒酶切产物的鉴定 | 第32-33页 |
| ·pET-EP0表达产物的鉴定 | 第33-35页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| ·ELISA检测 | 第34页 |
| ·Western-blot分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·免疫原的制备 | 第35页 |
| ·免疫程序 | 第35页 |
| ·抗体质量 | 第35-37页 |
| 4 特异性抑制EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选 | 第37-47页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·菌株、细胞和质粒 | 第37-38页 |
| ·工具酶和试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第38-39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法)及PEG纯化 | 第39页 |
| ·siRNA模板的设计、合成和表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pEP0-EGFP的构建 | 第40-41页 |
| ·细胞培养与共转染 | 第41页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第41页 |
| ·半定量RT-PCR | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-44页 |
| ·siRNA分子的设计、合成与表达载体的构建 | 第42页 |
| ·pEP0-EGFP的构建 | 第42页 |
| ·siRNAs对EP0基因表达的影响 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 5 EP0基因特异性siRNA分子对伪狂犬病毒复制的影响 | 第47-55页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·细胞、病毒和质粒 | 第47页 |
| ·工具酶和试剂 | 第47页 |
| ·IBRS-2细胞的复苏及培养 | 第47-48页 |
| ·细胞转染 | 第48页 |
| ·PRV的增殖方法 | 第48页 |
| ·PRV组织培养半数感染量(TCID_(50))的测定 | 第48-49页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第49页 |
| ·RT-PCR | 第49-50页 |
| ·Western-blot | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·siRNAs对PRV感染力水平的影响 | 第51-52页 |
| ·mRNA水平siRNAs干扰作用的影响 | 第52页 |
| ·蛋白质水平siRNAs干扰作用的影响 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 6 小结与展望 | 第55-57页 |
| ·EP0抗体的制备 | 第55页 |
| ·特异干扰EP0基因的siRNAs分子的合成和筛选 | 第55页 |
| ·筛选出的siRNAs对PRV复制和EP0基因的表达有干扰作用 | 第55页 |
| ·RNA干扰技术在病毒研究中的展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
