| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-15页 |
| 1 丝孢类生防真菌的剂型生物学、胁迫生物学及遗传操作 | 第15-45页 |
| ·丝孢类生防真菌的剂型生物学 | 第15-21页 |
| ·生防真菌的热胁迫生物学 | 第21-25页 |
| ·真菌细胞壁组成 | 第25-27页 |
| ·真菌胞壁疏水蛋白 | 第27-36页 |
| ·杀虫真菌的基因工程 | 第36-43页 |
| ·丝孢类真菌基因功能分析 | 第36-41页 |
| ·杀虫真菌的遗传转化 | 第41-42页 |
| ·杀虫真菌的遗传改造 | 第42-43页 |
| ·展望 | 第43-45页 |
| 2 球孢白僵菌分生孢子耐热生物学及其类疏水蛋白 | 第45-61页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌株 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·气生分生孢子固液双相法制备 | 第46页 |
| ·孢子耐热力与类疏水蛋白的影响因子 | 第46-47页 |
| ·分生孢子耐热力测定 | 第47页 |
| ·类疏水蛋白提取与测定 | 第47-48页 |
| ·类疏水蛋白电泳分析 | 第48页 |
| ·孢子金属元素含量测定 | 第48页 |
| ·数据分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-58页 |
| ·不同菌株孢子的耐热力 | 第48-49页 |
| ·不同菌株孢子的类疏水蛋白含量 | 第49-50页 |
| ·不同菌株类疏水蛋白的组分分析 | 第50-51页 |
| ·培养条件对孢子耐热力的影响 | 第51-53页 |
| ·培养条件对孢壁类疏水蛋白含量的影响 | 第53-54页 |
| ·培养条件对孢子FAE蛋白组分的影响 | 第54-55页 |
| ·孢子中金属离子的积累 | 第55-56页 |
| ·孢子耐热力与FAE蛋白含量的关联 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 3 耐热相关类疏水蛋白的基因克隆与分析 | 第61-73页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·菌株 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·蛋白纯化 | 第61-62页 |
| ·蛋白的电转印及检测 | 第62页 |
| ·蛋白的N-端序列测定 | 第62页 |
| ·BCW15蛋白编码序列的3′-RACE扩增 | 第62-63页 |
| ·扩增BCW15蛋白基因上游序列 | 第63-64页 |
| ·BCW15基因的Southern杂交分析 | 第64-65页 |
| ·不同菌株BCW15基因克隆与比较分析 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·BCW15蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·BCW15蛋白的氮端序列测定 | 第66页 |
| ·基因BCW15的克隆与序列分析 | 第66-68页 |
| ·基因BCW15的Southern杂交分析 | 第68-69页 |
| ·不同菌株的BCW15克隆与比较 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| 4 基于芽生孢子的球孢白僵菌遗传转化体系构建 | 第73-82页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-77页 |
| ·确定草丁膦的抑制浓度 | 第74页 |
| ·构建双元质粒 | 第74-76页 |
| ·感受态芽生孢子的制备 | 第76页 |
| ·芽生孢子转化过程 | 第76-77页 |
| ·转化子稳定性测试 | 第77页 |
| ·转化子鉴定 | 第77页 |
| ·构建Ploy A陷阱载体及转化 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-81页 |
| ·芽生孢子转化的质粒制备 | 第78页 |
| ·基因bar和exfp的表达 | 第78-80页 |
| ·Ploy A陷阱载体构建、转化与鉴定 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-82页 |
| 5 BCW15蛋白生物学功能验证 | 第82-89页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·菌株与质粒 | 第82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-84页 |
| ·构建BCW15基因反义质粒 | 第82-84页 |
| ·质粒转化 | 第84页 |
| ·转化子鉴定 | 第84页 |
| ·BCW15蛋白表达的检测 | 第84页 |
| ·测定孢子的耐热力 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-87页 |
| ·反义质粒构建与转化 | 第84页 |
| ·转化子鉴定 | 第84-85页 |
| ·BCW15蛋白的表达 | 第85-86页 |
| ·孢子的耐热力 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 6 基于球孢白僵菌芽生孢子转化的异源金属硫蛋白表达及功能 | 第89-97页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·菌株与质粒 | 第89页 |
| ·试剂 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-92页 |
| ·构建金属硫蛋白基因表达质粒 | 第90页 |
| ·质粒转化 | 第90页 |
| ·总巯基含量测定 | 第90-92页 |
| ·Western免疫印迹检测 | 第92页 |
| ·转化子鉴定 | 第92页 |
| ·测定孢子的耐热力 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-95页 |
| ·MT表达质粒构建与转化 | 第92页 |
| ·总巯基含量测定 | 第92-93页 |
| ·金属硫蛋白的表达 | 第93页 |
| ·转化子鉴定 | 第93-94页 |
| ·孢子的耐热力 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| 7 基于球孢白僵菌芽生孢子转化的异源硫氧还蛋白表达及功能 | 第97-105页 |
| ·材料 | 第97页 |
| ·菌株与质粒 | 第97页 |
| ·试剂 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-101页 |
| ·构建金属硫蛋白基因表达质粒 | 第97-99页 |
| ·质粒转化 | 第99页 |
| ·硫氧还蛋白活性测定 | 第99-100页 |
| ·Western免疫印迹检测 | 第100页 |
| ·转化子鉴定 | 第100页 |
| ·转化子孢子耐热力的测定 | 第100-101页 |
| ·结果与分析 | 第101-103页 |
| ·thxA表达质粒构建与转化 | 第101页 |
| ·硫氧还蛋白活力测定 | 第101页 |
| ·硫氧还蛋白的表达 | 第101-102页 |
| ·转化子鉴定 | 第102页 |
| ·孢子的耐热力 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-105页 |
| 8 结语 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-120页 |
| Summary | 第120-126页 |
| 附件:攻读学位期间的主要成果 | 第126-127页 |
