| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 木聚糖酶在饲料工业中应用 | 第10-11页 |
| 2 木聚糖酶的分类 | 第11-12页 |
| 3 木聚糖酶抑制剂的分类及抑制活性 | 第12-15页 |
| 4 木聚糖酶 TAXI型抑制剂的研究进展 | 第15-19页 |
| ·木聚糖酶 TAXI型抑制剂的分子结构 | 第15页 |
| ·木聚糖酶 TAXI型抑制剂的耐热性与耐酸碱性 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶结构的差异对 TAXI型抑制剂活性的影响 | 第16-17页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因的克隆和表达 | 第17-19页 |
| ·大肠杆菌表达 | 第17-18页 |
| ·酵母表达 | 第18-19页 |
| 5 研究目的 | 第19-21页 |
| 第二章 研究报告 | 第21-45页 |
| 一 小麦木聚糖酶 TAXI-Ⅰ型抑制剂基因的克隆与表达 | 第21-35页 |
| 1 策略 | 第21-23页 |
| ·克隆策略 | 第21-22页 |
| ·亚克隆策略 | 第22页 |
| ·表达策略 | 第22-23页 |
| 2 试验材料 | 第23-24页 |
| 3 试验方法 | 第24-30页 |
| ·小麦基因组 DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因TAXI-Ⅰ的克隆 | 第25-28页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因TAXI-Ⅰ基因的 PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物电泳 | 第25-26页 |
| ·目的片断的割胶回收 | 第26页 |
| ·割胶回收产物清洁 | 第26-27页 |
| ·TAXI-Ⅰ片段与pUCm-TVector的连接 | 第27页 |
| ·E.coli TOP 10F'感受态细胞的制备与转化 | 第27页 |
| ·菌落 PCR鉴定与质粒提取 | 第27-28页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因TAXI-Ⅰ的亚克隆 | 第28-29页 |
| ·pUCm-T TAXI-ⅠVector质粒抽提 | 第28页 |
| ·亚克隆中木聚糖酶抑制剂基因的 PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物电泳 | 第29页 |
| ·目的片断的割胶回收 | 第29页 |
| ·割胶回收产物清洁 | 第29页 |
| ·TAXIE片段与pUCm-T Vector的连接 | 第29页 |
| ·TOP 10F’感受态细胞的制备与转化 | 第29页 |
| ·菌落 PCR鉴定与质粒提取(见本章3.2.7) | 第29页 |
| ·木聚糖酶抑制剂TAXIE基因的表达 | 第29-30页 |
| ·重组质粒 T-TAXIE的酶切 | 第29-30页 |
| ·表达载体pET-30a(+)vector的酶切 | 第30页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因 TAXIE与表达载体的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞 E.coli BL21的制备和转化 | 第30页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第30页 |
| 4 试验结果 | 第30-35页 |
| ·木聚糖酶抑制剂TAXI-Ⅰ的 PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆子pUCm-T TAXI-Ⅰ的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第31-33页 |
| ·亚克隆中木聚糖酶抑制剂 TAXIE的 PCR扩增 | 第33页 |
| ·亚克隆阳性克隆子pUCm-T TAXIE的筛选与鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒与表达载体的双酶切 | 第33-34页 |
| ·木聚糖酶抑制剂TAXIE阳性表达子的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 二 重组木聚糖酶抑制剂的抑制特性 | 第35-45页 |
| 1 试验材料 | 第35-36页 |
| 2 培养基和培养方法 | 第36-37页 |
| ·培养基的配制 | 第36-37页 |
| ·各种木聚糖酶和木聚糖酶抑制剂的培养方法 | 第37页 |
| 3 分析方法 | 第37-40页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂抑制活性定义 | 第37页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂抑制活性测定方法 | 第37-38页 |
| ·标准曲线制作 | 第38页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂抑制特性分析 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第38-40页 |
| 4 试验结果 | 第40-43页 |
| ·抑制剂活性的剂量效应 | 第40页 |
| ·温度对木聚糖酶抑制剂活性的影响 | 第40-41页 |
| ·反应时间对木聚糖酶抑制剂活性的影响 | 第41页 |
| ·木聚糖酶抑制剂的热稳定性 | 第41页 |
| ·木聚糖酶抑制剂对不同来源木聚糖酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·木聚糖酶抑制剂的 SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| ·木聚糖酶抑制剂在大肠杆菌中表达 | 第43页 |
| ·大肠杆菌分泌表达的木聚糖酶抑制剂的特性研究 | 第43-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 附录一 pUCM-T vector | 第53-54页 |
| 附录二 pET-30a(+) Vevtor | 第54-55页 |
| 附录三 本文主要英文缩写词 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
