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家蚕(Bombyx mori)piggyBac转座子转基因载体的构建及转基因方法的研究

文献综述第1-33页
 1 家蚕丝蛋白及其基因结构的研究第13-16页
   ·家蚕丝心蛋白重链(fib-H)第13-15页
     ·丝心蛋白重链的结构第13-14页
     ·丝心蛋白重链基因的结构第14-15页
   ·家蚕丝心蛋白轻链(fib-L)第15页
   ·丝蛋白P25第15页
   ·L 链和H链的连接在丝心蛋白生物合成中的作用第15-16页
 2 丝蛋白基因的表达调控研究第16-17页
   ·丝蛋白基因的上游调控区域第16页
   ·参与调控丝蛋白基因表达的影响因素第16-17页
 3 转基因家蚕的研究进展第17-27页
   ·外源基因导入蚕的方法第18-23页
     ·显微注射法第18-19页
     ·精子介导法第19-21页
     ·脂质体法第21页
     ·电穿孔法第21页
     ·脉冲场电泳法第21-22页
     ·基因枪法第22页
     ·病毒介导法第22-23页
   ·外源基因在家蚕基因组中的整合与表达第23-25页
     ·外源基因在家蚕基因组中的整合第23-24页
     ·影响外源基因表达的因素第24-25页
   ·转基因研究中所用的报告基因及检测方式第25-27页
 4 展望第27页
 参考文献第27-33页
第一章 家蚕(Bombyx mori)胞质肌动蛋白基因启动子的克隆及piggyBac 转座子表达载体的构建第33-51页
 摘要第33-34页
 1材料和方法第34-40页
   ·实验材料第34-36页
     ·动物材料第34页
     ·菌种和质粒第34页
     ·酶和试剂第34页
     ·培养基第34-35页
     ·常用试剂配制第35-36页
     ·主要仪器设备第36页
   ·实验方法第36-40页
     ·家蚕后部丝腺基因组DNA的提取第37页
     ·引物的设计合成第37页
     ·PCR扩增体系第37-38页
     ·PCR 产物的回收第38页
     ·DNA 片段的分离及纯化第38-39页
     ·质粒DNA转化第39-40页
       ·感受态细胞的制备第39页
       ·质粒DNA的转化第39-40页
     ·质粒DNA提取第40页
     ·限制性内切酶反应第40页
     ·DNA连接反应第40页
     ·DNA序列的测定和分析第40页
 2 结果与讨论第40-48页
   ·细胞质肌动蛋白基因启动子的克隆及序列分析第40-43页
   ·辅助质粒的构建第43-45页
   ·转座子转基因表达载体的构建第45-48页
     ·中间载体pZGFPN的构建第45-46页
     ·表达质粒pZAGFP 的构建第46-48页
 3 小结第48-49页
 参考文献第49-51页
第二章 家蚕(Bombyx mori)丝心蛋白轻链cDNA、基因调控片段和终止子的克隆及序列分析第51-64页
 摘要第51-52页
 1 材料和方法第52-56页
   ·实验材料第52-53页
     ·家蚕(Bombyxmori)品种第52页
     ·菌种和质粒第52页
     ·工具酶和生化试剂第52页
     ·培养基第52页
     ·常用试剂配制第52-53页
   ·实验方法第53-56页
     ·家蚕后部丝腺总RNA的提取第53页
     ·RNA 甲醛变性凝胶电泳第53-54页
       ·制胶第53-54页
       ·样品处理第54页
       ·电泳第54页
       ·染色第54页
     ·引物的设计合成第54-55页
     ·RT–PCR扩增L-cDNA第55-56页
 2 结果第56-57页
   ·RT-PCR合成并克隆家蚕丝心蛋白轻链cDNA第56页
   ·PCR合成并克隆家蚕丝心蛋白轻链基因调控片段和终止子片段第56-57页
 3 讨论第57-61页
   ·家蚕L 链cDNA的序列分析第57-60页
   ·家蚕丝心蛋白轻链基因调控片段的序列分析第60-61页
   ·家蚕丝心蛋白轻链基因终止子的序列分析第61页
 4 小结第61-62页
 参考文献第62-64页
第三章 家蚕(Bombyx mori)转基因方法的初步研究第64-73页
 摘要第64-65页
 1材料和方法第65-68页
   ·实验材料第65页
     ·动物材料第65页
     ·菌种和质粒第65页
     ·酶和试剂第65页
     ·引物的设计与合成第65页
     ·培养基和常用试剂第65页
   ·方法第65-68页
     ·PCR 扩增检测第65-66页
     ·显微注射法第66-67页
       ·钨针、显微注射针制备第66页
       ·上液第66页
       ·蚕卵的预处理和显微注射第66-67页
     ·精子介导法第67页
     ·脂质体法第67-68页
       ·注射针的制备第67-68页
       ·注射第68页
     ·压力渗透法第68页
     ·家蚕基因组DNA的提取第68页
 2 结果和讨论第68-71页
   ·外源基因的导入第68-70页
   ·转基因载体有效性的研究第70-71页
 3 小结第71-72页
 参考文献第72-73页
附图一 家蚕细胞质肌动蛋白A3 基因启动子反向测序图第73-74页
附图二 家蚕丝心蛋白轻链基因启动子反向测序图第74-75页
附图三 家蚕丝心蛋白轻链cDNA 反向测序图第75-76页
附图四 家蚕丝心蛋白轻链基因终止子反向测序图第76-77页
硕士研究生期间发表的论文第77-78页
致谢第78页

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