文献综述 | 第1-33页 |
1 家蚕丝蛋白及其基因结构的研究 | 第13-16页 |
·家蚕丝心蛋白重链(fib-H) | 第13-15页 |
·丝心蛋白重链的结构 | 第13-14页 |
·丝心蛋白重链基因的结构 | 第14-15页 |
·家蚕丝心蛋白轻链(fib-L) | 第15页 |
·丝蛋白P25 | 第15页 |
·L 链和H链的连接在丝心蛋白生物合成中的作用 | 第15-16页 |
2 丝蛋白基因的表达调控研究 | 第16-17页 |
·丝蛋白基因的上游调控区域 | 第16页 |
·参与调控丝蛋白基因表达的影响因素 | 第16-17页 |
3 转基因家蚕的研究进展 | 第17-27页 |
·外源基因导入蚕的方法 | 第18-23页 |
·显微注射法 | 第18-19页 |
·精子介导法 | 第19-21页 |
·脂质体法 | 第21页 |
·电穿孔法 | 第21页 |
·脉冲场电泳法 | 第21-22页 |
·基因枪法 | 第22页 |
·病毒介导法 | 第22-23页 |
·外源基因在家蚕基因组中的整合与表达 | 第23-25页 |
·外源基因在家蚕基因组中的整合 | 第23-24页 |
·影响外源基因表达的因素 | 第24-25页 |
·转基因研究中所用的报告基因及检测方式 | 第25-27页 |
4 展望 | 第27页 |
参考文献 | 第27-33页 |
第一章 家蚕(Bombyx mori)胞质肌动蛋白基因启动子的克隆及piggyBac 转座子表达载体的构建 | 第33-51页 |
摘要 | 第33-34页 |
1材料和方法 | 第34-40页 |
·实验材料 | 第34-36页 |
·动物材料 | 第34页 |
·菌种和质粒 | 第34页 |
·酶和试剂 | 第34页 |
·培养基 | 第34-35页 |
·常用试剂配制 | 第35-36页 |
·主要仪器设备 | 第36页 |
·实验方法 | 第36-40页 |
·家蚕后部丝腺基因组DNA的提取 | 第37页 |
·引物的设计合成 | 第37页 |
·PCR扩增体系 | 第37-38页 |
·PCR 产物的回收 | 第38页 |
·DNA 片段的分离及纯化 | 第38-39页 |
·质粒DNA转化 | 第39-40页 |
·感受态细胞的制备 | 第39页 |
·质粒DNA的转化 | 第39-40页 |
·质粒DNA提取 | 第40页 |
·限制性内切酶反应 | 第40页 |
·DNA连接反应 | 第40页 |
·DNA序列的测定和分析 | 第40页 |
2 结果与讨论 | 第40-48页 |
·细胞质肌动蛋白基因启动子的克隆及序列分析 | 第40-43页 |
·辅助质粒的构建 | 第43-45页 |
·转座子转基因表达载体的构建 | 第45-48页 |
·中间载体pZGFPN的构建 | 第45-46页 |
·表达质粒pZAGFP 的构建 | 第46-48页 |
3 小结 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-51页 |
第二章 家蚕(Bombyx mori)丝心蛋白轻链cDNA、基因调控片段和终止子的克隆及序列分析 | 第51-64页 |
摘要 | 第51-52页 |
1 材料和方法 | 第52-56页 |
·实验材料 | 第52-53页 |
·家蚕(Bombyxmori)品种 | 第52页 |
·菌种和质粒 | 第52页 |
·工具酶和生化试剂 | 第52页 |
·培养基 | 第52页 |
·常用试剂配制 | 第52-53页 |
·实验方法 | 第53-56页 |
·家蚕后部丝腺总RNA的提取 | 第53页 |
·RNA 甲醛变性凝胶电泳 | 第53-54页 |
·制胶 | 第53-54页 |
·样品处理 | 第54页 |
·电泳 | 第54页 |
·染色 | 第54页 |
·引物的设计合成 | 第54-55页 |
·RT–PCR扩增L-cDNA | 第55-56页 |
2 结果 | 第56-57页 |
·RT-PCR合成并克隆家蚕丝心蛋白轻链cDNA | 第56页 |
·PCR合成并克隆家蚕丝心蛋白轻链基因调控片段和终止子片段 | 第56-57页 |
3 讨论 | 第57-61页 |
·家蚕L 链cDNA的序列分析 | 第57-60页 |
·家蚕丝心蛋白轻链基因调控片段的序列分析 | 第60-61页 |
·家蚕丝心蛋白轻链基因终止子的序列分析 | 第61页 |
4 小结 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-64页 |
第三章 家蚕(Bombyx mori)转基因方法的初步研究 | 第64-73页 |
摘要 | 第64-65页 |
1材料和方法 | 第65-68页 |
·实验材料 | 第65页 |
·动物材料 | 第65页 |
·菌种和质粒 | 第65页 |
·酶和试剂 | 第65页 |
·引物的设计与合成 | 第65页 |
·培养基和常用试剂 | 第65页 |
·方法 | 第65-68页 |
·PCR 扩增检测 | 第65-66页 |
·显微注射法 | 第66-67页 |
·钨针、显微注射针制备 | 第66页 |
·上液 | 第66页 |
·蚕卵的预处理和显微注射 | 第66-67页 |
·精子介导法 | 第67页 |
·脂质体法 | 第67-68页 |
·注射针的制备 | 第67-68页 |
·注射 | 第68页 |
·压力渗透法 | 第68页 |
·家蚕基因组DNA的提取 | 第68页 |
2 结果和讨论 | 第68-71页 |
·外源基因的导入 | 第68-70页 |
·转基因载体有效性的研究 | 第70-71页 |
3 小结 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-73页 |
附图一 家蚕细胞质肌动蛋白A3 基因启动子反向测序图 | 第73-74页 |
附图二 家蚕丝心蛋白轻链基因启动子反向测序图 | 第74-75页 |
附图三 家蚕丝心蛋白轻链cDNA 反向测序图 | 第75-76页 |
附图四 家蚕丝心蛋白轻链基因终止子反向测序图 | 第76-77页 |
硕士研究生期间发表的论文 | 第77-78页 |
致谢 | 第78页 |