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负载口蹄疫病毒VP1-VP4融合蛋白质的树突状细胞启动的T细胞应答

摘要第1-6页
Abstract第6-12页
1 引言第12-22页
   ·口蹄疫研究进展第12-16页
     ·口蹄疫的流行病学第12-13页
     ·口蹄疫疫苗研究及现状第13页
     ·FMDV 基因结构与功能第13-15页
     ·FMDV 抗原性与变异性第15-16页
     ·FMDV 外壳蛋白VP1 和VP4第16页
     ·FMDV 的免疫应答机制研究进展第16页
   ·DC 的研究进展第16-20页
     ·DC 抗原提呈途径第17-18页
     ·DC 摄取外源性抗原方式第18页
     ·DC 的模式识别第18-19页
     ·DC 提呈FMDV 的研究进展第19-20页
   ·T 淋巴细胞介导的细胞免疫第20-21页
   ·本研究的目的和意义第21-22页
2 实验材料及仪器第22-25页
   ·菌株与载体第22-23页
   ·主要实验材料第23-24页
   ·主要仪器设备第24-25页
3 试验方法第25-44页
   ·主要试剂配制第25-28页
     ·抗生素类第25页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化所用溶液第25页
     ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液第25页
     ·诱导表达用溶液第25页
     ·SDS-PAGE 的相关溶液第25-26页
     ·电洗脱用溶液第26-27页
     ·Western-blotting 用溶液第27页
     ·细胞培养用溶液第27-28页
   ·重组质粒pET-32a-VP1-VP4 的构建与制备第28-35页
     ·引物设计与合成第29页
     ·重组质粒pGEM-T-Easy-VP1 的构建及制备第29-31页
     ·重组质粒pET-32a-VP1 的构建及制备第31-34页
     ·重组质粒pET-32a-VP1-VP4 的构建及制备第34-35页
   ·pET-32a-VP1-VP4 的诱导表达及目的蛋白的获得第35-39页
     ·pET-32a-VP1-VP4 的诱导表达及诱导条件优化第35-38页
     ·目的蛋白的纯化回收即电洗脱第38页
     ·重组蛋白的western blot 鉴定第38-39页
   ·淋巴结T 细胞和骨髓源树突细胞的制备第39-40页
     ·试验动物第39-40页
     ·小鼠颈浅淋巴结内T 细胞的制备第40页
     ·骨髓源树突细胞的制备第40页
   ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 对T 细胞的活化效应第40-44页
     ·制备BMDCs 的细胞悬液第40-41页
     ·小鼠BMDCs 的计数第41页
     ·小鼠淋巴结T 细胞的计数第41页
     ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 与T 细胞共培养第41页
     ·经甘露糖受体抑制剂处理过的BMDCs 负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养第41-42页
     ·经清道夫受体抑制剂处理过的BMDCs 负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养第42页
     ·经巨胞饮抑制剂处理过的 BMDCs 负载 FMDV VP1-VP4 蛋白质与 T 细胞共培养第42页
     ·ELISA 测定共培养物中 IFN-γ的含量第42-43页
     ·ELISA 测定共培养物中 IL-4 的含量第43页
     ·统计处理第43-44页
4 结果第44-58页
   ·pET-32a-VP1-VP4 质粒构建第44-46页
     ·pET-32a-VP1 质粒构建第44-45页
     ·pET-32a-VP1-VP4 质粒构建第45-46页
   ·重组蛋白的获得与鉴定第46-51页
     ·重组表达菌的诱导表达和SDS-PAGE 分析第46-47页
     ·重组蛋白最佳诱导条件的确定第47-49页
     ·重组蛋白的可溶性检测第49页
     ·重组蛋白的纯化与浓度测定第49-50页
     ·重组蛋白的western blot 鉴定第50-51页
   ·BMDCs 的制备与表型鉴定第51-52页
   ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 对T 细胞的活化效应第52-58页
     ·BMDCs 经处理后负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养产生 IFN-γ的水平第52-57页
     ·BMDCs 经不同抑制剂处理后负载VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养产生IL-4 的水平第57-58页
5 讨论第58-61页
   ·原核表达载体及纯化方法的选择第58-59页
   ·BMDCs 负载 FMDV VP1-VP4 融合蛋白对T 细胞活化的影响第59-61页
6 结论第61-62页
   ·巨胞饮是BMDCs 捕获VP1-VP4 抗原的主要方式第61页
   ·甘露糖受体、清道夫受体在BMDCs 提呈VP1-VP4 抗原进而活化淋巴结T 细胞过程中发挥负调节作用第61页
   ·巨胞饮─溶酶体─MHC-II─CD4+T 细胞─Th1 应答是BMDCs 提呈VP1-VP4 抗原的最主要途径第61页
   ·BMDCs 以交叉提呈途径启动淋巴结T 细胞应答;第61页
   ·BMDCs 可对 CD8+T 细胞发挥旁位活化作用第61-62页
参考文献第62-69页
在读期间发表的学术论文第69-70页
作者简历第70-71页
致谢第71-72页

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