| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| ·口蹄疫研究进展 | 第12-16页 |
| ·口蹄疫的流行病学 | 第12-13页 |
| ·口蹄疫疫苗研究及现状 | 第13页 |
| ·FMDV 基因结构与功能 | 第13-15页 |
| ·FMDV 抗原性与变异性 | 第15-16页 |
| ·FMDV 外壳蛋白VP1 和VP4 | 第16页 |
| ·FMDV 的免疫应答机制研究进展 | 第16页 |
| ·DC 的研究进展 | 第16-20页 |
| ·DC 抗原提呈途径 | 第17-18页 |
| ·DC 摄取外源性抗原方式 | 第18页 |
| ·DC 的模式识别 | 第18-19页 |
| ·DC 提呈FMDV 的研究进展 | 第19-20页 |
| ·T 淋巴细胞介导的细胞免疫 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第22-25页 |
| ·菌株与载体 | 第22-23页 |
| ·主要实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 3 试验方法 | 第25-44页 |
| ·主要试剂配制 | 第25-28页 |
| ·抗生素类 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化所用溶液 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第25页 |
| ·诱导表达用溶液 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE 的相关溶液 | 第25-26页 |
| ·电洗脱用溶液 | 第26-27页 |
| ·Western-blotting 用溶液 | 第27页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP1-VP4 的构建与制备 | 第28-35页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·重组质粒pGEM-T-Easy-VP1 的构建及制备 | 第29-31页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP1 的构建及制备 | 第31-34页 |
| ·重组质粒pET-32a-VP1-VP4 的构建及制备 | 第34-35页 |
| ·pET-32a-VP1-VP4 的诱导表达及目的蛋白的获得 | 第35-39页 |
| ·pET-32a-VP1-VP4 的诱导表达及诱导条件优化 | 第35-38页 |
| ·目的蛋白的纯化回收即电洗脱 | 第38页 |
| ·重组蛋白的western blot 鉴定 | 第38-39页 |
| ·淋巴结T 细胞和骨髓源树突细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·试验动物 | 第39-40页 |
| ·小鼠颈浅淋巴结内T 细胞的制备 | 第40页 |
| ·骨髓源树突细胞的制备 | 第40页 |
| ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 对T 细胞的活化效应 | 第40-44页 |
| ·制备BMDCs 的细胞悬液 | 第40-41页 |
| ·小鼠BMDCs 的计数 | 第41页 |
| ·小鼠淋巴结T 细胞的计数 | 第41页 |
| ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 与T 细胞共培养 | 第41页 |
| ·经甘露糖受体抑制剂处理过的BMDCs 负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养 | 第41-42页 |
| ·经清道夫受体抑制剂处理过的BMDCs 负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养 | 第42页 |
| ·经巨胞饮抑制剂处理过的 BMDCs 负载 FMDV VP1-VP4 蛋白质与 T 细胞共培养 | 第42页 |
| ·ELISA 测定共培养物中 IFN-γ的含量 | 第42-43页 |
| ·ELISA 测定共培养物中 IL-4 的含量 | 第43页 |
| ·统计处理 | 第43-44页 |
| 4 结果 | 第44-58页 |
| ·pET-32a-VP1-VP4 质粒构建 | 第44-46页 |
| ·pET-32a-VP1 质粒构建 | 第44-45页 |
| ·pET-32a-VP1-VP4 质粒构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的获得与鉴定 | 第46-51页 |
| ·重组表达菌的诱导表达和SDS-PAGE 分析 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白最佳诱导条件的确定 | 第47-49页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第49页 |
| ·重组蛋白的纯化与浓度测定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的western blot 鉴定 | 第50-51页 |
| ·BMDCs 的制备与表型鉴定 | 第51-52页 |
| ·负载FMDV VP1-VP4 蛋白质的BMDCs 对T 细胞的活化效应 | 第52-58页 |
| ·BMDCs 经处理后负载FMDV VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养产生 IFN-γ的水平 | 第52-57页 |
| ·BMDCs 经不同抑制剂处理后负载VP1-VP4 蛋白质与T 细胞共培养产生IL-4 的水平 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-61页 |
| ·原核表达载体及纯化方法的选择 | 第58-59页 |
| ·BMDCs 负载 FMDV VP1-VP4 融合蛋白对T 细胞活化的影响 | 第59-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| ·巨胞饮是BMDCs 捕获VP1-VP4 抗原的主要方式 | 第61页 |
| ·甘露糖受体、清道夫受体在BMDCs 提呈VP1-VP4 抗原进而活化淋巴结T 细胞过程中发挥负调节作用 | 第61页 |
| ·巨胞饮─溶酶体─MHC-II─CD4+T 细胞─Th1 应答是BMDCs 提呈VP1-VP4 抗原的最主要途径 | 第61页 |
| ·BMDCs 以交叉提呈途径启动淋巴结T 细胞应答； | 第61页 |
| ·BMDCs 可对 CD8+T 细胞发挥旁位活化作用 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
