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采用cDNA-AFLP技术研究香蕉在尖孢镰刀菌古巴专化型诱导下的基因差异表达

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-10页
1 前言第10-33页
   ·香蕉概况第10页
   ·香蕉的主要病虫害第10-11页
   ·香蕉枯萎病第11-17页
     ·香蕉枯萎病的分布及危害第11-12页
     ·香蕉枯萎病的病原菌第12页
     ·香蕉枯萎病病原菌的生物学特性第12-13页
     ·香蕉枯萎病病原菌的侵染途径和致病机理第13页
     ·香蕉镰刀菌枯萎病的发病症状第13-14页
     ·香蕉枯萎病的防治第14-16页
     ·香蕉对枯萎病病原菌的抗性机理研究第16-17页
   ·植物与病原菌相互作用的研究第17-21页
     ·病原菌致病相关基因第17-19页
     ·防卫反应基因第19-20页
     ·植物与病原物相互作用关系第20-21页
   ·基因差异表达的研究方法第21-30页
     ·消减杂交(SH)第21页
     ·抑制消减杂交(SSH)第21-23页
     ·mRNA差异显示(DDRT-PCR)第23-24页
     ·cDNA代表性差异分析(cDNA-RDA)第24-25页
     ·基因表达系列分析(SAGE)第25-26页
     ·表达序列标签(ESTs)第26-27页
     ·cDNA微阵列(cDNA Microassay)第27页
     ·cDNA-AFLP技术第27-30页
   ·本研究课题的目的、意义与内容第30-33页
     ·目的与意义第30-31页
     ·研究内容第31-32页
     ·技术路线第32-33页
2 材料与方法第33-48页
   ·实验材料第33页
   ·主要仪器与试剂第33-35页
     ·主要仪器第33页
     ·培养基及试剂第33-35页
   ·香蕉枯萎病病原菌的分离及鉴定第35-37页
     ·香蕉枯萎病病原菌的分离第35-36页
     ·病原菌的DNA提取第36页
     ·ITS引物设计与序列扩增第36-37页
     ·琼脂糖凝胶DNA回收纯化第37页
     ·测序及生物信息学分析第37页
   ·香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的培养第37-38页
   ·香蕉的枯萎病菌接种实验方法第38页
   ·香蕉叶片的总RNA提取第38-39页
     ·实验准备第38页
     ·总RNA提取方法第38-39页
   ·cDNA-AFLP实验方法第39-46页
     ·cDNA的合成第39-40页
     ·接头和引物的合成第40-41页
     ·cDNA的酶切第41页
     ·接头连接第41-42页
     ·预扩增第42页
     ·选择性扩增第42-43页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染第43-44页
     ·差异表达片段的回收与纯化第44-45页
     ·差异表达片段克隆第45-46页
     ·差异表达片段测序及生物信息学分析第46页
   ·半定量RT-PCR验证差异表达基因的真实性第46-48页
3 结果与分析第48-66页
   ·病原菌的分离与鉴定第48-51页
     ·病原菌的分离第48-49页
     ·病原菌分生孢子观察第49页
     ·病原菌ITS序列扩增及序列分析第49-51页
   ·香蕉的枯萎病菌接种第51页
   ·香蕉的总RNA提取第51-52页
   ·双链cDNA的合成第52-53页
   ·cDNA酶切片段的预扩增第53页
   ·选择性扩增第53-54页
   ·差异表达基因筛选第54-55页
   ·目的片段的克隆及测序第55-64页
   ·差异表达基因的半定量RT-PCR分析第64-66页
4 讨论第66-75页
   ·病原菌的分离与培养第66页
   ·接种方法的探索第66-67页
   ·cDNA-AFLP实验的注意事项第67页
   ·差异表达序列的分析第67-73页
     ·转录调控相关的特异基因第68-70页
     ·信号传导相关的特异基因第70-71页
     ·疾病与防御反应相关的特异基因第71-73页
   ·半定量RT-PCR技术在差异表达基因表达谱分析中的应用第73-74页
   ·本研究的局限性和后续研究设想第74-75页
5 结论第75-76页
参考文献第76-86页
致谢第86页

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