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微载体制备甲肝灭活疫苗的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-10页
前言第10-15页
第一部分:甲肝病毒的分离、适应和鉴定第15-38页
 一、材料和方法第15-23页
  一) 材料第15-19页
  二) 方法第19-23页
   1、细胞培养第19-20页
   2、病毒培养及收毒第20-21页
   3、ELISA测定HAV抗原第21页
   4、感染滴度的测定第21-22页
   5、HAV增殖动力学第22页
   6、HAV特异性鉴定第22-23页
 二、结果第23-33页
  1、采集的HAV样品第23-24页
  2、在MEK细胞上分离HAV第24页
  3、在Vero细胞上分离HAV第24页
  4、HAV的特异性鉴定第24-30页
  5、传代性适应第30-31页
  6、HAV毒株在MEK细胞及Vero细胞上的增殖动力学第31-32页
  7、Vero细胞适应株W的带毒传代第32-33页
 三、讨论第33-37页
  1、粪便中HAV的分离第33-34页
  2、特异性鉴定分析第34-35页
  3、甲肝病毒的传代适应第35-36页
  4、Vero细胞及其适应株W的持续感染第36-37页
  5、HAV释放到上清培养液中第37页
 四、结论第37-38页
第二部分:微载体技术制备甲肝病毒第38-50页
 一、材料和方法第38-40页
  一) 材料第38页
  二) 方法第38-40页
   1、微载体的处理第38-39页
   2、微载体培养细胞第39页
   3、病毒培养及收获第39-40页
   4、抗原滴度和感染滴度的测定第40页
 二、结果第40-47页
  一) 细胞在微载体上的生长第40-45页
  二) 甲肝病毒在微载体培养细胞的增殖第45-47页
 三、讨论第47-49页
 四、结论第49-50页
第三部分:甲肝灭活疫苗的免疫原性第50-57页
 一、材料和方法第50-52页
  一) 材料第50页
  二) 方法第50-52页
   1、微载体培养甲肝病毒的初步纯化第50-51页
   2、HAV的灭活第51页
   3、灭活病毒的佐剂吸附第51页
   4、动物免疫第51-52页
   5、ELISA竞争法检测血清抗体第52页
 二、结果第52-55页
  1、甲肝病毒的灭活第52-53页
  2、佐剂吸附情况第53页
  3、甲肝灭活疫苗的免疫原性第53-55页
 三、讨论第55-56页
 四、结论第56-57页
第四部分 甲肝病毒的基因分型和适应机理的探讨第57-74页
 一、材料和方法第57-65页
  一) 材料第57-60页
  二) 实验方法第60-65页
   1、AC-RT-PCR第60-61页
   2、目的片段重组至质粒pUC18第61-64页
   3、测序第64-65页
 二、结果第65-72页
  1、AC-RT-PCR扩增的片段第65-66页
  2、酶切鉴定克隆第66页
  3、HAV部分序列的比较与分析第66-71页
  4、HAV W株及HM175/WT株5'NCR部分区域二级结构的比较第71-72页
 三、讨论第72-73页
 四、结论第73-74页
参考文献第74-80页
论文综述第80-115页
 第一部分:甲肝病毒及其疫苗的研究进展第80-94页
 第二部分:微载体系统培养细胞技术第94-115页
附录1:测序结果彩色波形图第115-118页
附录2:感染滴度尾数查算表第118-119页
附录3:英文缩写词表第119-121页
附录4:甲肝病毒HM175/wt全基因组序列第121-124页
个人简历第124-125页
致谢第125页

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