| 一、中文摘要 | 第1-9页 |
| 二、英文摘要 | 第9-11页 |
| 三、前言 | 第11-13页 |
| 四、文献综述 | 第13-58页 |
| 1.IL—4的产生 | 第14-17页 |
| 2.IL—4的染色体基因结构 | 第17-21页 |
| 3.IL—4的基因克隆 | 第21-37页 |
| 4.IL—4的纯化及化学特性 | 第37-40页 |
| 5.IL—4受体 | 第40-43页 |
| 6.IL—4的生物活性 | 第43-50页 |
| 7.IL—4与其它白细胞介素和IFN—γ的相互作用 | 第50-58页 |
| 五、本研究目的 | 第58-59页 |
| 六、论文第一部分 基本实验材料与方法 | 第59-87页 |
| 1.实验材料 | 第59-70页 |
| 1) 主要仪器 | 第59-60页 |
| 2) 菌种 | 第60页 |
| 3) 细胞株 | 第60页 |
| 4) 质粒 | 第60-61页 |
| 5) 培养基 | 第61-66页 |
| 6) 限制性核酸内切酶及其它修饰酶类 | 第66页 |
| 7) 限制性核酸内切酶及其它修饰酶类反应缓冲液 | 第66-67页 |
| 8) DNA合成用试剂 | 第67-69页 |
| 9) DNA序列分析用试剂 | 第69页 |
| 10) 放射性同位素 | 第69页 |
| 11) 其它药品和试剂 | 第69-70页 |
| 2.实验方法 | 第70-87页 |
| 1) DNA片段的化学合成与纯化 | 第70-74页 |
| 2) DNA的纯化方法 | 第74-75页 |
| 3) 质粒DNA的提取 | 第75-78页 |
| 4) 细菌总RNA的提取 | 第78-79页 |
| 5) 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第79页 |
| 6) 合成DNA片段的5’端放射性标记 | 第79-80页 |
| 7) 菌落原位杂交 | 第80-81页 |
| 8) RNA杂交分析 | 第81-83页 |
| 9) 质粒DNA的序列分析 | 第83-85页 |
| 10) 基本分子克隆技术 | 第85-87页 |
| 七、论文第二部分 小鼠白细胞介素4基因的化学合成与克隆 | 第87-108页 |
| 1.材料与方法 | 第87-91页 |
| 1) 寡聚DNA片段的化学合成 | 第87页 |
| 2) MIL—4前半基因的克隆 | 第87-89页 |
| 3) MIL—4后半基因的克隆 | 第89-91页 |
| 4) MIL—4全基因的克隆 | 第91页 |
| 2.实验结果 | 第91-101页 |
| 1) DNA片段的合成与纯化 | 第91-94页 |
| 2) MIL-4前半基因的克隆 | 第94页 |
| 3) MIL-4后半基因的克隆 | 第94页 |
| 4) MIL-4全基因的克隆 | 第94-101页 |
| 3.讨论 | 第101-107页 |
| 1) DNA的化学合成及其应用 | 第101页 |
| 2) 基因片段的化学合成 | 第101-102页 |
| 3) DNA合成片段的组装 | 第102-105页 |
| 4) 基因克隆的检测 | 第105-107页 |
| 4.小结 | 第107-108页 |
| 八、论文第三部分 | 第108-122页 |
| 化学合成的MIL-4基因在pRC23、pSM43和pSM53三种大肠杆菌表达质粒中的克隆 | 第108-122页 |
| 1.材料与方法 | 第108-110页 |
| 1) MIL-4基因在pRC23表达质粒中的克隆 | 第108-110页 |
| 2) MIL-4基因在pS43表达质粒中的克隆 | 第110页 |
| 3) MIL-4基因在pSM53表达质粒中的克隆 | 第110页 |
| 2.实验结果 | 第110-118页 |
| 1) MIL-4基因在pRC23表达质粒中的克隆 | 第110-114页 |
| 2) MIL-4基因在pSM43表达质粒中的克隆 | 第114页 |
| 3) MIL-4基因在pSM53表达质粒中的克隆 | 第114-118页 |
| 3.讨论 | 第118-121页 |
| 4.小结 | 第121-122页 |
| 九、论文第四部分 | 第122-132页 |
| MIL-4特异RNA的表达分析和表达蛋白的活性检测 | 第122-132页 |
| 1.材料和方法 | 第122-125页 |
| 1) MIL-4基因在RNA水平表达的分析 | 第122-123页 |
| ① 细菌的培养、温度诱导和总RNA的提取 | 第122-123页 |
| ② RNA打点杂交 | 第123页 |
| ③ Northem转移杂交 | 第123页 |
| 2)MIL-4基因表达蛋白的活性检测 | 第123-125页 |
| ① 蛋白质样品的制备 | 第123-124页 |
| ② 表达蛋白的生物活性检测 | 第124-125页 |
| 2.实验结果 | 第125-128页 |
| 1) RNA打点杂交 | 第125页 |
| 2) Northem转移杂交 | 第125-127页 |
| 3) MIL-4的生物活性检测 | 第127-128页 |
| 3.讨论 | 第128-131页 |
| 1) MIL-4基因在RNA水平的表达 | 第128-129页 |
| 2) 反义RNA的表达 | 第129-130页 |
| 3) MIL-4的生物活性检测 | 第130-131页 |
| 4.小结 | 第131-132页 |
| 十、总结 | 第132-133页 |
| 十一、致谢 | 第133-134页 |
| 十二、参考文献 | 第134-152页 |
