内容提要 | 第1-8页 |
第一章 前言 | 第8-15页 |
1. SOD 与衰老的自由基学说 | 第8-10页 |
·SOD-3 的生物学功能 | 第8-9页 |
·秀丽隐杆线虫的sod-3 基因 | 第9-10页 |
2. 秀丽隐杆线虫 | 第10-11页 |
3. 秀丽隐杆线虫的 RNAi 方法 | 第11-12页 |
4. RNA 干扰机制 | 第12-14页 |
5. 实验设计 | 第14-15页 |
第二章 材料和方法 | 第15-34页 |
1. 实验材料、试剂和仪器 | 第15-19页 |
·实验材料 | 第15页 |
·主要试剂 | 第15-16页 |
·主要仪器 | 第16-17页 |
·溶液配制 | 第17-19页 |
2. 实验方法 | 第19-34页 |
·基本分子生物学实验方法 | 第20-21页 |
·提取 C.elegans 总 RNA | 第21页 |
·sod-3 基因的反转录和扩增 | 第21-23页 |
·克隆载体的构建和测定 | 第23-24页 |
·表达载体的构建 | 第24-27页 |
·sod-3 基因dsRNA 的表达 | 第27-31页 |
·RNAi 线虫sod-3 基因mRNA 表达量的检测 | 第31-32页 |
·sod-3 对线虫寿命(Life-Span)的影响 | 第32页 |
·sod-3 对线虫产卵(Egg-laying)数目的影响 | 第32页 |
·利用sod-3::GFP 突变体线虫(cf1553)对 RNAi 效果在蛋白水平的检测 | 第32-34页 |
第三章 结果与讨论 | 第34-44页 |
1. 目的基因的扩增与克隆载体的构建 | 第34页 |
2. sod-3 基因的测序鉴定 | 第34-35页 |
3. 重组干扰质粒的构建 | 第35页 |
4. 阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第35-36页 |
5. 重组干扰质粒的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
6. sod-3 基因干扰效果 | 第37-39页 |
7. IPTG 浓度对sod-3 基因干扰效果的影响 | 第39-40页 |
8. sod-3 基因RNA 干扰对秀丽线虫寿命和产卵量的影响 | 第40-42页 |
9. sod-3 基因RNAi 对sod-3::GFP 突变体线虫(cf1553)的影响 | 第42-43页 |
10. 小结 | 第43-44页 |
结论 | 第44-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
中文摘要 | 第52-54页 |
英文摘要 | 第54-56页 |
致谢 | 第56-57页 |