| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-22页 |
| 第一章 猪瘟病毒研究进展 | 第11-17页 |
| ·猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第11-13页 |
| ·猪瘟病毒基因结构 | 第11页 |
| ·猪瘟病毒编码的蛋白 | 第11-12页 |
| ·猪瘟病毒编码的蛋白及其功能 | 第12-13页 |
| ·猪瘟病毒分子免疫学研究进展 | 第13-17页 |
| ·猪瘟病毒的体液免疫 | 第13-15页 |
| ·猪瘟病毒的细胞免疫学 | 第15-17页 |
| 第二章 猪瘟诊断技术研究进展 | 第17-22页 |
| ·临床诊断 | 第17页 |
| ·实验室诊断 | 第17-22页 |
| ·病毒分离 | 第17页 |
| ·动物试验 | 第17-18页 |
| ·血清学诊断方法 | 第18页 |
| ·琼脂扩散试验（AGP） | 第18页 |
| ·荧光抗体试验（FAT） | 第18页 |
| ·间接血凝试验（IHA） | 第18页 |
| ·中和试验 | 第18-19页 |
| ·兔体中和试验 | 第18-19页 |
| ·荧光抗体病毒中和试验（FAVN） | 第19页 |
| ·过氧化物酶联中和试验（NPLA） | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第19-20页 |
| ·免疫胶体金技术（IGSS） | 第20页 |
| ·分子生物学技术 | 第20-22页 |
| ·RT-PCR 技术 | 第20-21页 |
| ·核酸探针技术 | 第21页 |
| ·基因芯片检测技术 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-55页 |
| 第三章 猪瘟病毒 E0 基因在大肠杆菌中的表达 | 第22-39页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌种和载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液配方 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 | 第26页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶电泳 | 第26页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第26-27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物和载体酶切回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第28页 |
| ·BL21 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第31页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第31-32页 |
| ·IPTG 最佳诱导浓度的确定 | 第31-32页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第32页 |
| ·表达产物的检测 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第33页 |
| ·重组质粒pET-FJ237-E0 的鉴定结果 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第34-35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第35-36页 |
| ·不同IPTG 浓度的诱导表达 | 第35页 |
| ·不同时间的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·Western blot 分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·CSFV E0 基因片段的扩增 | 第37页 |
| ·pET-E0 表达重组质粒的构建 | 第37页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·表达条件的优化 | 第38页 |
| ·重组蛋白的抗原性鉴定 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 重组蛋白的纯化及猪瘟病毒 E0 抗原 间接 ELISA 方法的建立 | 第39-55页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·主要试剂及血清样品 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·用于蛋白纯化溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·ELISA 所用溶液 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达 | 第41页 |
| ·目的蛋白存在情况检测 | 第41页 |
| ·镍柱的处理 | 第41页 |
| ·镍柱的再生 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·纯化蛋白的浓缩 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白浓度的测定及抗原性的测定 | 第43页 |
| ·重组蛋白间接ELISA 检测方法的初步研究 | 第43-45页 |
| ·棋盘滴定法选择抗原和血清的工作浓度 | 第43页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第43页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第43页 |
| ·最佳血清及二抗反应时间的确定 | 第43-44页 |
| ·最佳底物反应时间的确定 | 第44页 |
| ·间接 ELISA 的特异性试验 | 第44页 |
| ·重复性试验 | 第44页 |
| ·临床样品的检测及符合性试验 | 第44页 |
| ·间接ELISA 的操作程序 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-51页 |
| ·重组蛋白的制备及纯化 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白浓度的计算及抗原性测定 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA 方法的初步建立 | 第47-51页 |
| ·棋盘滴定法选择抗原和血清的工作浓度 | 第47-48页 |
| ·间接ELISA 各项试验条件的优化 | 第48页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·选用猪瘟流行毒株 pET-FJ E0 蛋白建立 ELISA 诊断方法的意义 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白存在形式检测 | 第52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |