| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| ·稻瘟病菌基因组学的研究 | 第11-15页 |
| ·稻瘟病菌分子标记的发展与利用 | 第11-12页 |
| ·稻瘟病菌遗传图谱、物理图谱的构建 | 第12-13页 |
| ·稻瘟病菌大片段基因组文库的构建 | 第13-14页 |
| ·稻瘟病菌的全基因组测序 | 第14-15页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因的研究进展 | 第15-22页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因的遗传分析 | 第15-18页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因的克隆 | 第18-20页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因研究的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·供试菌株 | 第22页 |
| ·供试植物 | 第22页 |
| ·稻瘟病菌毒性/无毒性测定 | 第22-23页 |
| ·分生孢子扩大培养 | 第22页 |
| ·育苗和接种方法 | 第22页 |
| ·调查和记载 | 第22-23页 |
| ·BAC 亚克隆 | 第23-26页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·亚克隆载体 | 第23页 |
| ·BAC 亚克隆 | 第23-26页 |
| ·小量制备质粒DNA | 第23页 |
| ·小量制备BAC DNA | 第23-24页 |
| ·质粒 DNA 酶切 | 第24页 |
| ·pBluescript SK/SK(-)酶切产物的去磷酸化处理 | 第24-25页 |
| ·去磷酸化后的pBluescript SK | 第25页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·SSR 方法 | 第26-27页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA 的提取 | 第26页 |
| ·稻瘟病菌SSR 引物 | 第26页 |
| ·SSR 引物的筛选 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增及检测 | 第27页 |
| ·多态标记方法 | 第27-28页 |
| ·多态标记引物 | 第27页 |
| ·多态标记的筛选 | 第27-28页 |
| ·多态标记的PCR 扩增及检测 | 第28页 |
| ·遗传连锁图谱的构建 | 第28页 |
| ·805L15 的序列分析 | 第28-29页 |
| ·805L15 测序的Contig 拼接 | 第28页 |
| ·基因预测 | 第28页 |
| ·预测基因的功能预测 | 第28-29页 |
| ·预测信号肽表达载体构建 | 第29-32页 |
| ·酶切方法构建预测信号肽互补载体 | 第29-31页 |
| ·质粒载体 | 第29页 |
| ·预测信号肽的克隆 | 第29页 |
| ·互补载体的构建 | 第29-31页 |
| ·酵母同源重组方法构建预测信号肽过表达(OE)载体 | 第31-32页 |
| ·载体及菌株 | 第31-32页 |
| ·酵母同源重组 | 第32页 |
| ·BAC 克隆子805L15 的Cosmid 文库构建 | 第32-35页 |
| ·805L15 的酶切 | 第32-33页 |
| ·大片段DNA 回收 | 第33页 |
| ·回收片段和经酶切、去磷酸化载体的末端平滑化 | 第33-34页 |
| ·连接载体 | 第34页 |
| ·体外包装 | 第34页 |
| ·重组子验证 | 第34-35页 |
| ·稻瘟病菌的遗传转化 | 第35-36页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第35页 |
| ·稻瘟病菌原生质体转化和转化子的验证 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-63页 |
| ·BAC 亚克隆 | 第36-40页 |
| ·BAC DNA 的酶切、与载体的连接、转化和亚克隆子的筛选 | 第36-38页 |
| ·亚克隆子的测序及序列分析 | 第38-40页 |
| ·根据亚克隆子序列开发标记 | 第40页 |
| ·数据库序列的SSR 标记开发 | 第40-43页 |
| ·805L15 的测序及序列分析 | 第43-54页 |
| ·选择BAC 克隆子805L15 进行测序 | 第43-44页 |
| ·多态性标记的筛选及PCR 扩增结果 | 第44-48页 |
| ·标记L230 的PCR 扩增结果分析 | 第44-45页 |
| ·标记L891-2 的PCR 扩增结果分析 | 第45-46页 |
| ·标记L469-1 的PCR 扩增结果分析 | 第46-47页 |
| ·标记L469-3 的PCR 扩增结果分析 | 第47页 |
| ·标记L213-1 的PCR 扩增结果分析 | 第47-48页 |
| ·BAC 805L15 序列的SSR 标记开发 | 第48-49页 |
| ·805L15 序列Contig 的拼接 | 第49-50页 |
| ·805L15 序列中基因的预测及基因的功能和细胞定位预测 | 第50-54页 |
| ·81278 中的无毒基因簇与分子标记的遗传距离分析 | 第54-57页 |
| ·预测信号肽表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·酶切方法构建预测信号肽互补载体 | 第57-58页 |
| ·酵母同源重组方法构建预测信号肽过表达载体 | 第58页 |
| ·BAC 805L15 的Cosmid 文库构建及转化子验证 | 第58-61页 |
| ·805L15 的Cosmid 文库构建 | 第58-59页 |
| ·805L15 的Cosmid 转化子验证 | 第59-61页 |
| ·稻瘟病菌的遗传转化 | 第61-63页 |
| ·稻瘟病菌转化子的HygB 抗性筛选 | 第61-62页 |
| ·转化子的致病性分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| ·BAC 亚克隆序列分析 | 第63页 |
| ·805L15 的测序及序列分析 | 第63-64页 |
| ·多态标记的开发 | 第63-64页 |
| ·805L15 序列中基因的预测及基因的功能和细胞定位预测 | 第64页 |
| ·包含无毒基因簇与分子标记的遗传图谱的构建 | 第64-65页 |
| ·BAC 克隆子805L15 的Cosmid 文库构建及转化子验证 | 第65页 |
| ·稻瘟病菌的遗传转化 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
