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猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及灭活疫苗的免疫效果研究

致谢第1-10页
摘要第10-11页
文献综述第11-25页
 1 猪繁殖与呼吸综合征流行概况第11-13页
   ·易感动物与宿主第11页
   ·传染源与传播途径第11-12页
   ·PRRS 的流行趋势第12-13页
 2 猪繁殖与呼吸综合征病原学特性第13-19页
   ·PRRSV 的一般特性第13-14页
   ·病毒基因结构和表达第14页
   ·病毒的结构蛋白第14-16页
     ·GP2 蛋白第14-15页
     ·GP3 蛋白第15页
     ·GP4 蛋白第15页
     ·GP5 蛋白(E 蛋白)第15页
     ·膜基质蛋白(M 蛋白)第15-16页
     ·核衣壳蛋白(N 蛋白)第16页
   ·病毒基因组的遗传变异第16-19页
     ·PRRSV 毒株ORF5 基因序列变异性第17-18页
     ·野毒株与疫苗株差异性第18-19页
 3 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法第19-22页
   ·病毒分离第19页
   ·血清学诊断第19-20页
     ·免疫过氧化物酶单层试验( IPMA)第19页
     ·间接荧光抗体试验( IFA)第19页
     ·血清中和试验(SN)第19-20页
     ·酶联免疫吸附试验(ELISA)第20页
     ·乳胶凝集试验(LAT)第20页
     ·胶体金技术第20页
     ·单克隆抗体技术第20页
   ·分子生物学诊断第20-22页
     ·聚合酶链反应(PCR)技术第20-22页
       ·反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)第21页
       ·套式PCR第21页
       ·实时RT-PCR第21-22页
     ·核酸探针原位杂交技术(ISH)第22页
     ·重组蛋白分子诊断技术第22页
 4、猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫特性第22-25页
   ·PRRSV 对免疫系统的影响第22页
   ·体液免疫第22-23页
   ·细胞免疫第23-24页
   ·疫苗第24-25页
引言第25-26页
试验一 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离鉴定第26-32页
 1 材料与方法第26-30页
   ·病料第26页
   ·细胞、菌种、载体第26页
   ·主要试剂及配制第26-27页
     ·PBS第26页
     ·1640 营养液第26页
     ·细胞生长液第26页
     ·细胞维持液第26页
     ·胰酶消化液(0.25%)第26页
     ·氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)贮存液第26页
     ·IPTG 溶液第26页
     ·X-gal 溶液第26-27页
     ·LB 液体培养基第27页
     ·50×TAE第27页
     ·DEPC 水第27页
     ·0.1M CaCl_2第27页
     ·LB 固体培养基第27页
     ·氨苄青霉素琼脂平板第27页
   ·其它试剂第27页
   ·主要仪器第27-28页
   ·病毒的分离培养第28页
     ·Marc-145 细胞的培养第28页
     ·PRRSV 的增殖第28页
   ·分离株N 蛋白基因的扩增、鉴定与分析第28-30页
     ·引物设计第28页
     ·PRRSV 总RNA 的提取第28-29页
     ·RT-PCR 扩增ORF7第29页
     ·PCR 产物的回收和纯化第29-30页
 2 结果与分析第30-31页
   ·病毒的培养第30页
   ·目的基因的扩增第30-31页
 3 小结与讨论第31-32页
试验二 猪繁殖与呼吸障碍综合征灭活疫苗免疫效果的研究第32-39页
 1 材料与方法第32-35页
   ·材料第32页
     ·试验猪只第32页
     ·试验毒株第32页
     ·主要试剂和试剂盒第32页
     ·主要仪器第32页
     ·试验地点第32页
   ·方法第32-35页
     ·免疫实验第32-33页
       ·试验分组第32页
       ·疫苗免疫剂量第32页
       ·免疫时间和次数第32页
       ·血样采集第32-33页
       ·酶联免疫吸附试验第33页
     ·攻毒试验第33-34页
       ·病毒培养第33-34页
       ·病毒TICD50 的测定第34页
       ·试验分组第34页
       ·疫苗免疫剂量第34页
       ·免疫时间和次数第34页
       ·攻毒时间第34页
       ·攻毒剂量及方式第34页
     ·病毒的RT-PCR 检测第34-35页
       ·样品处理第34页
       ·病毒RNA 的提取第34页
       ·反转录(RT)操作第34页
       ·PCR 操作第34-35页
       ·电泳第35页
       ·结果判定第35页
     ·多次免疫效果规律第35页
       ·试验分组第35页
       ·疫苗免疫剂量第35页
       ·免疫时间和次数第35页
       ·酶联免疫吸附试验第35页
 2 结果与分析第35-37页
   ·单次免疫效果分析第35-36页
   ·病毒含量测定第36页
   ·攻毒效果第36页
   ·病原 RT-PCR 检测结果第36-37页
   ·多次免疫效果第37页
 3 小结与讨论第37-39页
全文总结第39-40页
参考文献第40-48页
ABSTRACT第48-49页

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