致谢 | 第1-10页 |
摘要 | 第10-11页 |
文献综述 | 第11-25页 |
1 猪繁殖与呼吸综合征流行概况 | 第11-13页 |
·易感动物与宿主 | 第11页 |
·传染源与传播途径 | 第11-12页 |
·PRRS 的流行趋势 | 第12-13页 |
2 猪繁殖与呼吸综合征病原学特性 | 第13-19页 |
·PRRSV 的一般特性 | 第13-14页 |
·病毒基因结构和表达 | 第14页 |
·病毒的结构蛋白 | 第14-16页 |
·GP2 蛋白 | 第14-15页 |
·GP3 蛋白 | 第15页 |
·GP4 蛋白 | 第15页 |
·GP5 蛋白(E 蛋白) | 第15页 |
·膜基质蛋白(M 蛋白) | 第15-16页 |
·核衣壳蛋白(N 蛋白) | 第16页 |
·病毒基因组的遗传变异 | 第16-19页 |
·PRRSV 毒株ORF5 基因序列变异性 | 第17-18页 |
·野毒株与疫苗株差异性 | 第18-19页 |
3 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法 | 第19-22页 |
·病毒分离 | 第19页 |
·血清学诊断 | 第19-20页 |
·免疫过氧化物酶单层试验( IPMA) | 第19页 |
·间接荧光抗体试验( IFA) | 第19页 |
·血清中和试验(SN) | 第19-20页 |
·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第20页 |
·乳胶凝集试验(LAT) | 第20页 |
·胶体金技术 | 第20页 |
·单克隆抗体技术 | 第20页 |
·分子生物学诊断 | 第20-22页 |
·聚合酶链反应(PCR)技术 | 第20-22页 |
·反转录-聚合酶链反应(RT-PCR) | 第21页 |
·套式PCR | 第21页 |
·实时RT-PCR | 第21-22页 |
·核酸探针原位杂交技术(ISH) | 第22页 |
·重组蛋白分子诊断技术 | 第22页 |
4、猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫特性 | 第22-25页 |
·PRRSV 对免疫系统的影响 | 第22页 |
·体液免疫 | 第22-23页 |
·细胞免疫 | 第23-24页 |
·疫苗 | 第24-25页 |
引言 | 第25-26页 |
试验一 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离鉴定 | 第26-32页 |
1 材料与方法 | 第26-30页 |
·病料 | 第26页 |
·细胞、菌种、载体 | 第26页 |
·主要试剂及配制 | 第26-27页 |
·PBS | 第26页 |
·1640 营养液 | 第26页 |
·细胞生长液 | 第26页 |
·细胞维持液 | 第26页 |
·胰酶消化液(0.25%) | 第26页 |
·氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)贮存液 | 第26页 |
·IPTG 溶液 | 第26页 |
·X-gal 溶液 | 第26-27页 |
·LB 液体培养基 | 第27页 |
·50×TAE | 第27页 |
·DEPC 水 | 第27页 |
·0.1M CaCl_2 | 第27页 |
·LB 固体培养基 | 第27页 |
·氨苄青霉素琼脂平板 | 第27页 |
·其它试剂 | 第27页 |
·主要仪器 | 第27-28页 |
·病毒的分离培养 | 第28页 |
·Marc-145 细胞的培养 | 第28页 |
·PRRSV 的增殖 | 第28页 |
·分离株N 蛋白基因的扩增、鉴定与分析 | 第28-30页 |
·引物设计 | 第28页 |
·PRRSV 总RNA 的提取 | 第28-29页 |
·RT-PCR 扩增ORF7 | 第29页 |
·PCR 产物的回收和纯化 | 第29-30页 |
2 结果与分析 | 第30-31页 |
·病毒的培养 | 第30页 |
·目的基因的扩增 | 第30-31页 |
3 小结与讨论 | 第31-32页 |
试验二 猪繁殖与呼吸障碍综合征灭活疫苗免疫效果的研究 | 第32-39页 |
1 材料与方法 | 第32-35页 |
·材料 | 第32页 |
·试验猪只 | 第32页 |
·试验毒株 | 第32页 |
·主要试剂和试剂盒 | 第32页 |
·主要仪器 | 第32页 |
·试验地点 | 第32页 |
·方法 | 第32-35页 |
·免疫实验 | 第32-33页 |
·试验分组 | 第32页 |
·疫苗免疫剂量 | 第32页 |
·免疫时间和次数 | 第32页 |
·血样采集 | 第32-33页 |
·酶联免疫吸附试验 | 第33页 |
·攻毒试验 | 第33-34页 |
·病毒培养 | 第33-34页 |
·病毒TICD50 的测定 | 第34页 |
·试验分组 | 第34页 |
·疫苗免疫剂量 | 第34页 |
·免疫时间和次数 | 第34页 |
·攻毒时间 | 第34页 |
·攻毒剂量及方式 | 第34页 |
·病毒的RT-PCR 检测 | 第34-35页 |
·样品处理 | 第34页 |
·病毒RNA 的提取 | 第34页 |
·反转录(RT)操作 | 第34页 |
·PCR 操作 | 第34-35页 |
·电泳 | 第35页 |
·结果判定 | 第35页 |
·多次免疫效果规律 | 第35页 |
·试验分组 | 第35页 |
·疫苗免疫剂量 | 第35页 |
·免疫时间和次数 | 第35页 |
·酶联免疫吸附试验 | 第35页 |
2 结果与分析 | 第35-37页 |
·单次免疫效果分析 | 第35-36页 |
·病毒含量测定 | 第36页 |
·攻毒效果 | 第36页 |
·病原 RT-PCR 检测结果 | 第36-37页 |
·多次免疫效果 | 第37页 |
3 小结与讨论 | 第37-39页 |
全文总结 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-48页 |
ABSTRACT | 第48-49页 |