| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·节杆菌概论 | 第11页 |
| ·节杆菌的分布与生物学功能 | 第11页 |
| ·节杆菌的分类学特征 | 第11页 |
| ·细菌分裂概论 | 第11-20页 |
| ·骨架蛋白对于细菌分裂以及形态发生的影响 | 第12-13页 |
| ·细菌中微丝类似蛋白及其功能 | 第12页 |
| ·细菌中微管类似蛋白及其功能 | 第12-13页 |
| ·细菌中中间纤维类似蛋白及其功能 | 第13页 |
| ·放线菌中骨架蛋白研究现状 | 第13页 |
| ·FtsZ蛋白对于细菌分裂的影响 | 第13-15页 |
| ·Methanococcus jannaschii的FtsZ晶体结构与功能 | 第13-14页 |
| ·FtsZ的结构域分析 | 第14页 |
| ·FtsZ在细菌基因组中存在的位置的变化 | 第14-15页 |
| ·FtsZ聚合对于细菌分裂的重要性 | 第15页 |
| ·调节FtsZ聚合的蛋白 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌中调节FtsZ聚合的蛋白 | 第15页 |
| ·枯草芽孢杆菌中调节FtsZ聚合的蛋白 | 第15-16页 |
| ·柄杆菌中调节FtsZ聚合的蛋白 | 第16页 |
| ·分支杆菌中调节FtsZ聚合的蛋白 | 第16页 |
| ·新生细胞壁对于细菌形态发生的影响 | 第16-19页 |
| ·新生细胞壁研究方法的发展 | 第16-18页 |
| ·新生细胞壁模型的总结 | 第18页 |
| ·新生细胞壁染色的方法与局限 | 第18-19页 |
| ·细菌骨架蛋白对于新生细胞壁定位的影响 | 第19页 |
| ·调节枯草芽孢杆菌新生细胞壁的骨架蛋白mbl | 第19页 |
| ·放线菌中actin类似蛋白的研究进展 | 第19页 |
| ·新生细胞壁与已有细胞壁形成之间的关系 | 第19-20页 |
| ·节杆菌现今研究的状况与挑战 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·节杆菌培养条件 | 第22页 |
| ·节杆菌中使用的质粒 | 第22-23页 |
| ·节杆菌中组成型表达质粒 | 第22-23页 |
| ·节杆菌中整合使用的质粒 | 第23页 |
| ·大肠杆菌中使用的质粒 | 第23页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第23页 |
| ·基因克隆与大肠杆菌转化 | 第23-24页 |
| ·DNA提取与基因克隆 | 第23-24页 |
| ·质粒构建 | 第24页 |
| ·节杆菌质粒电击转化方法 | 第24-25页 |
| ·节杆菌电击感受态的制备 | 第24-25页 |
| ·节杆菌电击用的质粒制备 | 第25页 |
| ·节杆菌电击转化 | 第25页 |
| ·节杆菌基因敲除与敲入 | 第25-26页 |
| ·带有选择标签的敲除/敲入方式 | 第25页 |
| ·不带有选择标签的敲除/敲入方式 | 第25-26页 |
| ·蛋白质表达与纯化 | 第26-27页 |
| ·蛋白质表达 | 第26页 |
| ·His_6标签蛋白质纯化 | 第26页 |
| ·Gst标签蛋白质纯化 | 第26-27页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第27页 |
| ·多克隆抗体纯化 | 第27页 |
| ·免疫共沉淀 | 第27-28页 |
| ·利用sepharose-proteinA做的免疫共沉淀 | 第27页 |
| ·利用M2做的免疫共沉淀 | 第27-28页 |
| ·细菌双杂交 | 第28页 |
| ·细菌双杂交质粒与菌株 | 第28页 |
| ·细菌双杂交筛选 | 第28页 |
| ·荧光染色 | 第28-29页 |
| ·新生细胞壁荧光染色 | 第28页 |
| ·已有细胞壁荧光染色 | 第28页 |
| ·DNA荧光染色 | 第28-29页 |
| ·细胞膜染色 | 第29页 |
| ·荧光显微镜分析 | 第29页 |
| ·超速离心共沉淀 | 第29页 |
| ·OtsA酶活分析 | 第29页 |
| ·海藻糖含量测定 | 第29-30页 |
| ·海藻糖酶的原核表达纯化 | 第29-30页 |
| ·海藻糖含量的测定 | 第30页 |
| ·突变质粒构建 | 第30页 |
| ·原子力显微镜 | 第30-31页 |
| ·细胞壁的制备 | 第30-31页 |
| ·原子力显微镜分析 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE,Native-PAGE与Western blotting | 第31-32页 |
| ·样品制备 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·Native-PAGE电泳 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE Western blotting | 第31页 |
| ·Native-PAGE Western blotting | 第31-32页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第32-87页 |
| ·otsA缺失突变菌株形态与生长速度的变化 | 第32-34页 |
| ·野生型节杆菌受到盐胁迫下形态与生长速度的变化 | 第34-36页 |
| ·空间位阻不是影响otsA缺失突变菌株生长缓慢的原因 | 第36页 |
| ·otsA缺失突变菌株海藻糖回补分析 | 第36-38页 |
| ·强制降低野生型节杆菌体内海藻糖含量以及OtsA酶活相关分子后生长曲线分析 | 第38-39页 |
| ·野生型节杆菌新生细胞壁定位分析 | 第39-41页 |
| ·otsA缺失突变菌株新生细胞壁定位分析 | 第41-42页 |
| ·组成型表达OtsA菌株新生细胞壁定位分析 | 第42-44页 |
| ·盐胁迫不同时间野生型节杆菌新生细胞壁定位分析 | 第44-47页 |
| ·盐胁迫不同时间otsA缺失突变菌株新生细胞壁定位分析 | 第47-50页 |
| ·盐胁迫不同时间组成型表达otsA菌株新生细胞壁定位分析 | 第50-52页 |
| ·生长在不同盐浓度下野生型节杆菌新生细胞壁定位分析 | 第52-55页 |
| ·OtsA与FtsZ相互作用 | 第55-56页 |
| ·OtsA对FtsZ聚合的影响 | 第56-59页 |
| ·FtsZ抑制剂处理可以导致新生细胞壁环状结构的减少 | 第59-65页 |
| ·盐处理不同时间OtsA与FtsZ在节杆菌体内的含量与聚合状态 | 第65-68页 |
| ·生长在不同盐浓度下OtsA与FtsZ在野生型节杆菌体内的含量与聚合状态 | 第68页 |
| ·OtsA聚合状态改变影响节杆菌的形态 | 第68-71页 |
| ·盐处理前后野生型节杆菌细胞壁形态的变化 | 第71-73页 |
| ·盐处理前后otsA缺失突变菌株细胞壁形态的变化 | 第73-75页 |
| ·盐处理前后组成型表达otsA菌株细胞壁形态的变化 | 第75-77页 |
| ·生长在不同盐浓度下野生型节杆菌细胞壁形态的变化 | 第77-83页 |
| ·节杆菌体内不同OtsA含量造成的细胞壁厚度的变化 | 第83-85页 |
| ·不同OtsA含量的节杆菌对于高盐的耐受程度 | 第85-87页 |
| 第四章 讨论 | 第87-91页 |
| ·节杆菌利用OtsA这个保守的蛋白作为渗透压感受蛋白调节细菌的分裂 | 第87-88页 |
| ·OtsA/B蛋白广泛存在于多种生命体中 | 第87页 |
| ·OtsA以及相关代谢分子与细菌分裂之间的关系 | 第87-88页 |
| ·FtsZ这个保守的蛋白在细菌分裂中受到的调节 | 第88页 |
| ·FtsZ蛋白广泛存在于多种生命体中对细菌分裂起着重要的作用 | 第88页 |
| ·FtsZ聚合受到调节的方式 | 第88页 |
| ·新生细胞壁的定位与细菌抗逆 | 第88-90页 |
| ·新生细胞壁的迁移与定位 | 第88-89页 |
| ·细胞壁的结构与抗逆 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 在学期间的研究成果 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
