| 符号说明及缩写词 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| ·粘细菌简介 | 第17-18页 |
| ·粘细菌的遗传学研究 | 第18-24页 |
| ·粘细菌的分子生物学操作方法 | 第18页 |
| ·粘细菌来源或可以应用于粘细菌的噬菌体 | 第18-19页 |
| ·粘细菌中可以应用的转座子 | 第19-21页 |
| ·粘细菌中可以应用的整合质粒和自主复制质粒 | 第21-24页 |
| ·影响质粒稳定性的因素和基因 | 第24-33页 |
| ·质粒拷贝数对质粒遗传稳定性的影响 | 第24-25页 |
| ·质粒多聚体解聚系统对质粒拷贝数的影响 | 第25-26页 |
| ·质粒自主分配系统对质粒遗传稳定性的影响 | 第26-30页 |
| ·质粒后自杀系统对质粒遗传稳定性的影响 | 第30-33页 |
| 本文开展思路 | 第33-35页 |
| 第二章 粘细菌内源质粒pMF1预测遗传稳定区的克隆和稳定性验证 | 第35-59页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第36-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·主要培养基 | 第36-37页 |
| ·主要实验试剂 | 第37-40页 |
| ·常用溶液 | 第37-39页 |
| ·常用试剂盒、限制性内切酶和抗生素 | 第39-40页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第40-41页 |
| ·数据库及分析软件 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-52页 |
| ·粘细菌质粒pMF1的提取 | 第41-42页 |
| ·粘细菌质粒pMF1可能遗传稳定区的扩增 | 第42-47页 |
| ·引物的设计 | 第43页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第43-44页 |
| ·PCR产物纯化后加A反应 | 第44页 |
| ·加A反应后产物连接pGEM-T~(?) Easy Vector | 第44-45页 |
| ·E.coli超级感受态的制备 | 第45页 |
| ·连接产物或质粒转化E.coli方法 | 第45-46页 |
| ·E.coli转化子质粒提取 | 第46-47页 |
| ·转化子质粒酶切 | 第47页 |
| ·酶切产物经切胶回收3kb片段 | 第47页 |
| ·进行遗传稳定性测试的载体的制备 | 第47-49页 |
| ·质粒pZJY41线性片段的制备 | 第47-48页 |
| ·PCR产物或酶处理体系纯化(使用E.Z.N.A(?) Cycle-Pure Kit) | 第48页 |
| ·片段与载体的连接方法 | 第48-49页 |
| ·预测的质粒遗传稳定区的克隆 | 第49-50页 |
| ·重组载体在粘球菌中的稳定性测试 | 第50-52页 |
| ·重组载体电转化粘球菌DZ1 | 第50-51页 |
| ·粘球菌转化子稀释涂布纯化两次 | 第51页 |
| ·粘球菌转化子稳定性测定 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-58页 |
| ·对pMF1可能质粒自主分配序列的分析 | 第52页 |
| ·包含可能自主分配区域的穿梭载体的构建 | 第52-56页 |
| ·pZJY4112的构建 | 第54-55页 |
| ·pZJY4111和pZJY4114的构建 | 第55-56页 |
| ·pZJY4111,pZJY4112和pZJY4114在粘球菌DZ1中遗传稳定性 | 第56-58页 |
| ·pZJY4111,pZJY4112和pZJY4114电转化Myxococcus xanthus DZ1 | 第56页 |
| ·转化子的纯化 | 第56-57页 |
| ·纯化的转化子遗传稳定性测试 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 pMF1遗传稳定区域分段筛选 | 第59-87页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第59-61页 |
| ·菌株和质粒 | 第59-61页 |
| ·主要培养基 | 第61页 |
| ·主要实验试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-68页 |
| ·pZJY4117等载体的插入片断在pMF1上的位置 | 第61页 |
| ·pZJY4116和pZJY4117的构建 | 第61-62页 |
| ·pZJY4101-pZJY4108的构建 | 第62-65页 |
| ·线性DNA片段平末端化处理方法 | 第65-66页 |
| ·5'突出DNA黏末端的平末端处理方法 | 第65-66页 |
| ·3'突出DNA黏末端的平末端处理方法 | 第66页 |
| ·pZJY4109和PZJY4110的构建和稳定性测试 | 第66-68页 |
| ·pZJY4109和pZJY4110的构建 | 第66-68页 |
| ·上述重组载体在Myxococcus xanthus DZ1中的稳定性测试 | 第68页 |
| ·实验结果与分析 | 第68-83页 |
| ·pZJY4116和pZJY4117的构建与稳定性测试 | 第68-71页 |
| ·pZJY4116和pZJY4117的构建 | 第69-70页 |
| ·pZJY4116和pZJY4117转化Myxococcus xanthus DZ1 | 第70页 |
| ·pZJY4116在DZ1中的遗传稳定性 | 第70-71页 |
| ·pZJY4101-pZJY4108载体的构建和在DZ1中的稳定性测试 | 第71-81页 |
| ·pZJY4101-pZJY4108载体的构建 | 第71-76页 |
| ·pZJY4101-pZJY4108电转化Myxococcus xanthus DZ1及转化子的纯化 | 第76-81页 |
| ·pZJY4109和pZJY4110的构建及稳定性测试 | 第81-83页 |
| ·pZJY4109和pZJY4110的构建 | 第81-82页 |
| ·pZJY4109和pZJY4110电转化Myxococcus xanthus DZ1。 | 第82-83页 |
| ·pZJY4109和pZJY4110在Myxococcus xanthus DZ1中的遗传稳定性 | 第83页 |
| ·本章小结 | 第83-87页 |
| 结束语 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第98页 |
